Protokoller online

Fosfatbufret saltvand (forkortet som PBS) er en bufferopløsning, der almindeligvis anvendes i biologisk forskning. Det er en salt opløsning indeholdende natriumchlorid, natriumphosphat og (i nogle formuleringer) kaliumchlorid og kaliumphosphat. Bufferen hjælper med at opretholde en konstant pH. Osmolaritet og ionkoncentrationer af opløsningen matcher normalt de menneskelige legems (isotoniske).

Anvendelser

Kryosektion dit væv på bare tre timer med Cryoglass ™ fra Teomics.

PBS har mange anvendelser, fordi det er isotonisk og ikke-toksisk for celler. Det kan bruges til at fortynde stoffer. Det bruges til at skylle beholdere, der indeholder celler. PBS kan bruges som et fortyndingsmiddel i fremgangsmåder til tørring af biomolekyler, da vandmolekyler i det vil være struktureret omkring stoffet (for eksempel protein), der skal tørres og immobiliseres til en fast overflade. Den tynde film af vand, der binder til stoffet, forhindrer denaturering eller andre konformationsændringer. Carbonatbuffere kan anvendes til det samme formål, men med mindre effektivitet. PBS kan bruges til at tage et referencespektrum ved måling af proteinadsorptionen i ellipsometri.

Additiver kan bruges til at tilføje funktion. For eksempel bruges PBS med EDTA også til at frakoble vedhæftede og sammenklumpede celler. Divalente metaller såsom zink kan dog ikke tilsættes, da dette vil resultere i nedbør. Til denne type applikationer anbefales Goods buffere.

Forberedelse

Der er mange forskellige måder at forberede PBS på. Nogle formuleringer indeholder ikke kalium, mens andre indeholder calcium eller magnesium. Et af de mest almindelige præparater er beskrevet nedenfor.

En 10 liters bestand af 10x PBS kan fremstilles ved opløsning

• 800 g NaCl,
• 20 g KCl,
• 144 g Na2HPO4 · 2H20
• 24 g KH2PO4
• 8 L destilleret vand.

Efter fuldstændig blanding skal den endelige opløsning fyldes op til 10 L. pH-værdien på 10X-stammen er ca. 6,8, men når den fortyndes til 1x PBS, skal den ændre sig til 7,4. Når der fremstilles bufferopløsninger, er det god praksis at altid måle pH direkte ved hjælp af et pH-meter. Om nødvendigt kan pH justeres ved hjælp af saltsyre eller natriumhydroxid.

Ved fortynding skal den resulterende 1x PBS have en slutkoncentration på 137 mM NaCl, 10 mM phosphat, 2,7 mM KCl og en pH på 7.4.
Et andet præparat er beskrevet i Molecular Cloning af Sambrook, Fritsch og Maniatis, Appendiks B.12 som følger:

For 1 liter 1X PBS skal du forberede som følger:

1. Start med 800 ml destilleret vand:
2. Tilsæt 8 g NaCl.
3. Tilsæt 0,2 g KCl.
4. Tilsæt 1,44 g Na2HPO4 .
5. Tilsæt 0,24 g KH2PO4.
6. Juster pH til 7,4 med HCI.
7. Tilsæt destilleret vand til et samlet volumen på 1 liter.

Dispenser opløsningen i portioner og steriliser ved autoklavering (20 min., 121 ° C, væskecyklus). Opbevares ved stuetemperatur.

1. Dulbecco, R. et al. (1954): Dannelse af plak og isolering af rene linjer med poliomyelitisvira. I: J. Exp. Med. vol. 99 (2), s. 167-182. PMID 13130792
2. Sambrook, Fritsch og Maniatis (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2. udg., Cold Spring Harbour Laboratory Press, Cold Spring Harbour, New York, bind 3, bilag B.12
3. Dele af denne artikel er fra “Fosfatbufret saltvand. I Wikipedia, den gratis encyklopædi. Hentet 17. september 2008 fra http://en.wikipedia.org/wiki/Phosphate_buffered_saline.” Denne artikel er gennemgået for videnskabelig nøjagtighed og bruges i overensstemmelse med Wikipedias GNU Free Documentation License (GFDL).