Fluorescerende in situ-hybridisering (FISH)

Hvad er FISH?

Hvordan fungerer FISH?

Hvad bruges FISH til?

Hvor mange typer sonder til FISH?

Vores tjenester og produkter?

Citater / referencer?

****************************************** ************************************************* ************************************************

Hvad er FISK?

Fluorescens in situ hybridisering (FISH) er en slags cytogenetisk teknik, der bruger fluorescerende prober, der binder dele af kromosomet for at vise en høj grad af sekvenskomplementaritet. Fluorescensmikroskopi kan bruges til at finde ud af, hvor den fluorescerende probe er bundet til kromosomet. Denne teknik giver forskere en ny måde at visualisere og kortlægge det genetiske materiale i en individuel celle, herunder specifikke gener eller dele af gener. Det er et vigtigt redskab til at forstå en række kromosomale abnormiteter og andre genetiske mutationer. Forskellig fra de fleste andre teknikker, der anvendes til kromosomundersøgelse, har FISH intet behov for at blive udført på celler, der aktivt deler sig, hvilket gør det til en meget alsidig procedure.

Fig. 1 Skema for FISH-eksperimentets princip til lokalisering af et gen i kernen.

Hvordan fungerer FISH?

FISK er f.eks. nyttig til at hjælpe en forsker med at identificere, hvor et bestemt gen falder inden for individets kromosomer. Sådan fungerer det:
o Lav en probe komplementær til den kendte sekvens . Når du fremstiller sonden, skal du mærke den med en fluorescerende markør, f.eks. fluorescein, ved at inkorporere nukleotider, der har markøren knyttet til sig.
o Sæt kromosomerne på et objektglas og denaturerer dem.
o Denaturerer proben og tilføj den til objektglaset, så proben hybridiserer til dens komplementære site.
o Vask den overskydende probe væk, og observer kromosomerne under et fluorescerende mikroskop. Sonden vises som et eller flere fluorescerende signaler i mikroskopet, afhængigt af hvor mange steder den kan hybridisere til.

Fig. 2 De fem grundlæggende trin af FISK. (Oliveira og fransk 2005)

Hvad bruges FISH til?

FISH anvendes i vid udstrækning til flere diagnostiske anvendelser: identifikation af numeriske og strukturelle abnormiteter, karakterisering af markørkromosomer, overvågning af virkningerne af terapi, påvisning af minimal restsygdom, sporing af cellernes oprindelse efter knoglemarvstransplantation, identifikation af regioner med deletion eller amplifikation, påvisning af kromosomabnormiteter i ikke-delende eller terminalt differentierede celler, bestemmelse af linieinddragelse af klonale celler osv. Desuden har den mange anvendelser inden for forskning: identifikation af ikke-tilfældige kromosomomlejringer, identifikation af translokationsmolekylært brydepunkt, identifikation af almindeligt slettede regioner, genkortlægning, karakterisering af hybrider af somatiske celler, identifikation af amplificerede gener, undersøg mekanismen for omlejringer. FISH bruges også til at sammenligne genomerne fra to biologiske arter for at udlede evolutionære relationer.

Hvor mange typer sonder til FISH?

Generelt bruger forskere tre forskellige typer FISH-prober, som hver har en anden anvendelse:
Locus-specifikke prober binder til en bestemt region i et kromosom. Denne type probe er nyttig, når forskere har isoleret en lille del af et gen og ønsker at bestemme, hvilket kromosom genet er placeret.
Alfoid eller centromere gentagelsesprober genereres fra gentagne sekvenser, der findes midt i hvert kromosom. Forskere bruger disse sonder til at bestemme, om en person har det korrekte antal kromosomer. Disse sonder kan også bruges i kombination med “locus-specifikke sonder” til at bestemme, om et individ mangler genetisk materiale fra et bestemt kromosom.
Hele kromosomprober er faktisk samlinger af mindre prober, som hver især binder til en anden sekvens langs længden af et givet kromosom. Ved hjælp af flere sonder mærket med en blanding af forskellige fluorescerende farvestoffer er forskere i stand til at mærke hvert kromosom i sin egen unikke farve. Det resulterende fuldfarvekort over kromosomet er kendt som en spektral karyotype. Hele kromosomprober er især nyttige til undersøgelse af kromosomafvigelser, for eksempel når et stykke af et kromosom er fastgjort til enden af et andet kromosom.

Vores tjenester og produkter:

Creative Biolabs tilbyder en komplet vifte af brugerdefineret fluorescens in situ hybridiseringstjeneste (FISH) fra sonde-design, kromosom / celleforberedelse til ekspertresultatfortolkning.

Citater / referencer

FISH Probeeksempler:

Alle anførte tilpassede tjenester & produkter er kun til forskningsbrug, ikke beregnet til farmaceutisk, diagnostisk, terapeutisk eller til in vivo human brug.