Protokoller Online (Norsk)

Fosfatbufret saltvann (forkortet som PBS) er en bufferløsning som ofte brukes i biologisk forskning. Det er en salt løsning som inneholder natriumklorid, natriumfosfat og (i noen formuleringer) kaliumklorid og kaliumfosfat. Buffer hjelper til med å opprettholde en konstant pH. Osmolaritet og ionekonsentrasjoner av løsningen samsvarer vanligvis med menneskekroppens (isotoniske).

Applikasjoner

Kryoseksjon av vevet ditt på bare tre timer med Cryoglass ™ fra Teomics.

PBS har mange bruksområder fordi det er isotonisk og ikke-giftig for celler. Den kan brukes til å fortynne stoffer. Den brukes til å skylle beholdere som inneholder celler. PBS kan brukes som et fortynningsmiddel i metoder for å tørke biomolekyler, ettersom vannmolekyler i den vil være strukturert rundt stoffet (for eksempel protein) for å bli tørket og immobilisert til en fast overflate. Den tynne filmen med vann som binder seg til stoffet forhindrer denaturering eller andre konformasjonsendringer. Karbonatbuffere kan brukes til samme formål, men med mindre effektivitet. PBS kan brukes til å ta et referansespektrum når man måler proteinadsorpsjonen i ellipsometri.

Tilsetningsstoffer kan brukes til å legge til funksjon. For eksempel brukes PBS med EDTA også for å koble fra festede og klumpete celler. Divalente metaller som sink kan imidlertid ikke tilsettes, da dette vil føre til nedbør. For denne typen applikasjoner anbefales Goods buffere.

Forberedelse

Det er mange forskjellige måter å forberede PBS på. Noen formuleringer inneholder ikke kalium, mens andre inneholder kalsium eller magnesium. En av de vanligste preparatene er beskrevet nedenfor.

Et 10 liters lager av 10x PBS kan fremstilles ved å oppløse

• 800 g NaCl,
• 20 g KCl,
• 144 g Na2HPO4 · 2H2O
• 24 g KH2PO4
• 8 L destillert vann.

Etter fullstendig blanding fyller du opp den endelige løsningen til 10 L. pH-verdien på 10X lager er ca. 6,8, men når den fortynnes til 1x PBS, bør den endres til 7,4. Når du lager bufferløsninger, er det god praksis å alltid måle pH direkte ved hjelp av en pH-meter. Om nødvendig kan pH justeres ved hjelp av saltsyre eller natriumhydroksid.

Ved fortynning skal den resulterende 1x PBS ha en sluttkonsentrasjon på 137 mM NaCl, 10 mM fosfat, 2,7 mM KCl og en pH på 7.4.
Et annet preparat er beskrevet i Molecular Cloning av Sambrook, Fritsch og Maniatis, Appendiks B.12 som følger:

For 1 liter 1X PBS, forbered deg som følger:

1. Start med 800 ml destillert vann:
2. Tilsett 8 g NaCl.
3. Tilsett 0,2 g KCl.
4. Tilsett 1,44 g Na2HPO4 .
5. Tilsett 0,24 g KH2PO4.
6. Juster pH til 7,4 med HCl.
7. Tilsett destillert vann til et totalt volum på 1 liter.

Dispenser løsningen i alikvoter og steriliser ved autoklavering (20 minutter, 121 ° C, væskesyklus). Oppbevares ved romtemperatur.

1. Dulbecco, R. et al. (1954): Plakkdannelse og isolering av rene linjer med poliomyelittvirus. I: J. Exp. Med. vol. 99 (2), s. 167-182. PMID 13130792
2. Sambrook, Fritsch og Maniatis (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2. utg., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, bind 3, vedlegg B.12
3. Deler av denne artikkelen er fra «Fosfatbufret saltvann. I Wikipedia, gratis leksikon. Hentet 17. september 2008, fra http://en.wikipedia.org/wiki/Phosphate_buffered_saline.” Denne artikkelen har blitt gjennomgått for vitenskapelig nøyaktighet og brukes i samsvar med Wikipedias GNU Free Documentation License (GFDL).