Fluorescerende in situ-hybridisering (FISH) (Norsk)

Hva er FISH?

Hvordan fungerer FISH?

Hva brukes FISH til?

Hvor mange typer sonder for FISH?

Våre tjenester og produkter?

Sitater / referanser?

****************************************** ************************************************* *************************************************

Hva er FISK?

Fluorescens in situ hybridisering (FISH) er en slags cytogenetisk teknikk som bruker fluorescerende prober som binder deler av kromosomet for å vise en høy grad av sekvenskomplementaritet. Fluorescens-mikroskopi kan brukes til å finne ut hvor den fluorescerende sonden bundet til kromosomet. Denne teknikken gir forskere en ny måte å visualisere og kartlegge det genetiske materialet i en individuell celle, inkludert spesifikke gener eller deler av gener. Det er et viktig verktøy for å forstå en rekke kromosomale abnormiteter og andre genetiske mutasjoner. Forskjellig fra de fleste andre teknikker som brukes for kromosomstudier, har FISH ikke behov for å utføres på celler som aktivt deler seg, noe som gjør det til en veldig allsidig prosedyre.

Fig. 1 Skjema for prinsippet i FISH-eksperimentet for å lokalisere et gen i kjernen.

Hvordan fungerer FISH?

FISK er nyttig, for eksempel for å hjelpe en forsker med å identifisere hvor et bestemt gen faller innenfor individets kromosomer. Slik fungerer det:
o Lag en probe utfyllende til den kjente sekvensen . Når du lager sonden, merk den med en fluorescerende markør, f.eks. fluorescein, ved å inkorporere nukleotider som har markøren festet til seg.
o Sett kromosomene på et objektglass og denaturere dem.
o Denaturere sonden og legge den til mikroskopglasset, slik at sonden hybridiserer til dens komplementære sted.
o Vask overflødig sonde og observer kromosomene under et fluorescerende mikroskop. Sonden vil vises som ett eller flere fluorescerende signaler i mikroskopet, avhengig av hvor mange steder den kan hybridisere seg til.

Fig. 2 De fem grunnleggende trinnene av FISK. (Oliveira og fransk 2005)

Hva brukes FISH til?

FISH brukes mye til flere diagnostiske anvendelser: identifisering av numeriske og strukturelle abnormiteter, karakterisering av markørkromosomer, overvåking av effekten av terapi, påvisning av minimal restsykdom, sporing av opprinnelsen til celler etter benmargstransplantasjon identifisering av regioner for sletting eller amplifisering, påvisning av kromosomavvik i ikke-delende eller terminalt differensierte celler, bestemmelse av avstamningsinvolvering av klonale celler, etc. Videre har den mange anvendelser innen forskning: identifisering av ikke-tilfeldige kromosomomdannelser, identifisering av translokasjonsmolekylært brytpunkt, identifisering av ofte slettede regioner, genkartlegging, karakterisering av hybrider av somatiske celler, identifisering av forsterkede gener, studer mekanismen for omorganiseringer. FISH brukes også til å sammenligne genomene til to biologiske arter for å utlede evolusjonære relasjoner.

Hvor mange typer sonder for FISH?

Generelt bruker forskere tre forskjellige typer FISH-prober, som hver har en annen anvendelse:
Locus-spesifikke prober binder seg til en bestemt region i et kromosom. Denne typen sonde er nyttig når forskere har isolert en liten del av et gen og ønsker å bestemme hvilket kromosom genet er lokalisert.
Alfoid eller sentromere repeteringsprober genereres fra repeterende sekvenser funnet i midten av hvert kromosom. Forskere bruker disse sonder for å avgjøre om et individ har riktig antall kromosomer. Disse sonder kan også brukes i kombinasjon med «locus-spesifikke sonder» for å avgjøre om et individ mangler genetisk materiale fra et bestemt kromosom.
Hele kromosomprober er faktisk samlinger av mindre prober, som hver binder seg til en annen sekvens langs lengden på et gitt kromosom. Ved å bruke flere sonder merket med en blanding av forskjellige fluorescerende fargestoffer, er forskere i stand til å merke hvert kromosom i sin egen unike farge. Det resulterende fullfargekartet over kromosomet er kjent som en spektral karyotype. Hele kromosomsonder er spesielt nyttige for å undersøke kromosomavvik, for eksempel når et stykke av ett kromosom er festet til enden av et annet kromosom.

Våre tjenester og produkter:

Creative Biolabs tilbyr et komplett utvalg av tilpasset fluorescens in situ hybridiseringstjeneste (FISH) fra sonde design, kromosom / celle forberedelse til ekspert resultat tolkning.

sitater / referanser

FISH-sondeeksempler:

Alle listede tilpassede tjenester & produkter er kun til forskningsbruk, ikke ment for farmasøytisk, diagnostisk, terapeutisk eller til in vivo menneskelig bruk.