Blodagar, hemolyse og hemolytiske reaksjoner
Blodagar er et solid vekstmedium som inneholder røde blodlegemer. Mediet brukes til å oppdage bakterier som produserer enzymer for å bryte fra hverandre blodcellene. Denne prosessen kalles også hemolyse. I hvilken grad blodcellene hemolyseres brukes til å skille bakterier fra hverandre.
Blodagarmediet fremstilles i en to-trinns prosess. Først tilsettes en rekke ingredienser i vann, inkludert hjerteinfusjon, pepton og natriumklorid. Denne løsningen er sterilisert. Etter sterilisering tilsettes en kjent mengde sterilt blod. Blodet kan være fra kanin eller sau. Kaninblod foretrekkes hvis målbakterien er fra gruppen kjent som gruppe A Streptococcus. Saueblod foretrekkes hvis målbakterien er Haemophilus parahaemolyticus.
Blodagar er en rik matkilde for bakterier. Så den kan brukes til primær dyrking, det vil si som et middel for å oppnå et så bredt spekter av bakterievekst fra en prøve som mulig. Det brukes vanligvis ikke til dette formålet, men på grunn av mediet. Andre, billigere agarer vil gjøre det samme. Det blodagar er unikt egnet for er bestemmelsen av hemolyse.
Hemolyse er nedbrytningen av membranen til røde blodlegemer av et bakterieprotein kjent som hemolysin, som forårsaker frigjøring av hemoglobin fra det røde blodet. celle. Mange typer bakterier har hemolytiske proteiner. Disse proteinene antas å virke ved å integrere seg i membranen til de røde blodcellene og enten stanse et hull gjennom membranen eller forstyrre strukturen til membranen på en annen måte. De nøyaktige molekylære detaljene av hemolysin-virkningen er fortsatt ikke løst.
Blodet som brukes i agaren blir også behandlet på forhånd for å fjerne et molekyl som kalles fibrin, som deltar i koaguleringen av blod. Fraværet av fibrin sørger for at blodpropp ikke forekommer i agaren, noe som kan forstyrre den visuelle påvisning av hemolytiske reaksjoner.
Det er tre typer hemolyse, betegnet alfa, beta og gamma. Alfahemolyse er en grønnaktig misfarging som omgir en bakteriekoloni som vokser på agaren. Denne typen hemolyse representerer en delvis nedbrytning av hemoglobinet i de røde blodcellene. Alfahemolyse er karakteristisk for Streptococcus lungebetennelse og kan derfor brukes som et diagnostisk trekk ved identifisering av bakteriestammen. Betahemolyse representerer en fullstendig nedbrytning av hemoglobinet i de røde blodcellene i nærheten av en bakteriekoloni. Det er en rydding av agaren rundt en koloni. Beta-hemolyse er karakteristisk for Streptococcus pyogenes og noen stammer av Staphylococcus aureus.
Den tredje typen hemolyse er faktisk ingen hemolyse. Gammahemolyse er mangel på hemolyse i området rundt en bakteriekoloni. En blodagarplate som viser gammahemolyse, virker faktisk brunlig. Dette er en normal reaksjon av blodet på vekstbetingelsene som brukes (37 ° C i nærvær av karbondioksid). Gammahemolyse er et kjennetegn ved Enterococcus faecalis.
Hemolytiske reaksjoner kan også vise noe synergi. Det vil si at kombinasjonen av reaksjoner gir en reaksjon som er sterkere enn begge reaksjonene alene. Visse arter av bakterier, som gruppe B Strep (et eksempel er Streptococcus agalactiae) er svakt beta-hemolytisk. Imidlertid, hvis bakteriene er i nærheten av en staphylococcus-stamme, kan betahemolysinene til de to organismer kombineres for å gi en intens beta-hemolytisk reaksjon. Dette danner grunnlaget for en test kalt CAMP-testen (etter initialene til oppfinnerne).
Bestemmelsen av hemolyse og av hemolytiske reaksjoner er nyttig for å skille forskjellige typer bakterier. Påfølgende biokjemisk testing kan begrense identifikasjonen ytterligere. For eksempel er en beta-hemolytisk reaksjon en indikasjon på en streptokokk. Testing av Streptococcus-organismer med bacitracin er ofte neste trinn. Bacitracin er et antimikrobielt middel som produseres av bakterien Bacillus subtilis. Streptococcus pyogenes-stammer er nesten ensartede følsomme for bacitracin. Men andre antigene grupper av Streptococcus er ikke bacitracin-sensitive.
Se også Laboratorieteknikker i mikrobiologi; Stafylokokker og stafylokokkinfeksjoner; Streptokokker og streptokokkinfeksjoner