Protocoles en ligne

Solution saline tamponnée au phosphate (en abrégé PBS) est une solution tampon couramment utilisée dans la recherche biologique. Il sagit dune solution salée contenant du chlorure de sodium, du phosphate de sodium et (dans certaines formulations) du chlorure de potassium et du phosphate de potassium. Le tampon aide à maintenir un pH constant. Losmolarité et les concentrations ioniques de la solution correspondent généralement à celles du corps humain (isotoniques).

Applications

Cryosection de vos tissus en seulement trois heures avec Cryoglass ™ de Teomics.

Le PBS a de nombreuses utilisations car il est isotonique et non toxique pour les cellules. Il peut être utilisé pour diluer des substances. Il est utilisé pour rincer les récipients contenant des cellules. Le PBS peut être utilisé comme diluant dans les méthodes de séchage des biomolécules, car les molécules d’eau qu’il contient seront structurées autour de la substance (protéine, par exemple) à «sécher» et à immobiliser sur une surface solide. Le film mince deau qui se lie à la substance empêche la dénaturation ou dautres changements conformationnels. Les tampons carbonates peuvent être utilisés dans le même but mais avec moins defficacité. Le PBS peut être utilisé pour prendre un spectre de référence lors de la mesure de ladsorption de protéines en ellipsométrie.

Des additifs peuvent être utilisés pour ajouter une fonction. Par exemple, le PBS avec EDTA est également utilisé pour désengager les cellules attachées et agglutinées. Cependant, les métaux divalents tels que le zinc ne peuvent pas être ajoutés car cela entraînera une précipitation. Pour ces types d’applications, les tampons de Good sont recommandés.

Préparation

Il existe de nombreuses façons différentes de préparer PBS. Certaines formulations ne contiennent pas de potassium, tandis que dautres contiennent du calcium ou du magnésium. Une des préparations les plus courantes est décrite ci-dessous.

Un stock de 10 litres de 10x PBS peut être préparé en dissolvant

• 800 g de NaCl,
• 20 g KCl,
• 144 g Na2HPO4 · 2H2O
• 24 g KH2PO4
• 8 L deau distillée.

Une fois le mélange terminé, ajoutez la solution finale à 10 L. Le pH du stock 10X est denviron 6,8, mais lorsquil est dilué dans 1x PBS, il doit passer à 7,4.Lors de la préparation de solutions tampons, il est recommandé de toujours mesurer le pH. directement à laide dun pH-mètre. Si nécessaire, le pH peut être ajusté à laide dacide chlorhydrique ou dhydroxyde de sodium.

Lors de la dilution, le 1x PBS résultant doit avoir une concentration finale de 137 mM NaCl, 10 mM phosphate, 2,7 mM KCl et un pH de 7.4.
Une autre préparation est décrite dans Molecular Cloning by Sambrook, Fritsch and Maniatis, Annexe B.12 comme suit:

Pour 1 litre de 1X PBS, préparer comme suit:

1. Commencez avec 800 ml deau distillée:
2. Ajoutez 8 g de NaCl.
3. Ajoutez 0,2 g de KCl.
4. Ajoutez 1,44 g de Na2HPO4 .
5. Ajouter 0,24 g de KH2PO4.
6. Ajuster le pH à 7,4 avec HCl.
7. Ajouter de leau distillée à un volume total de 1 litre.

Répartir la solution en aliquotes et stériliser par autoclavage (20 min, 121 ° C, cycle liquide). Conserver à température ambiante.

1. Dulbecco, R. et al. (1954): Formation de plaques et isolement de lignées pures avec des virus de la poliomyélite. Dans: J. Exp. Med. vol. 99 (2), pp. 167-182. PMID 13130792
2. Sambrook, Fritsch et Maniatis (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2e éd., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, volume 3, annexe B.12
3. Certaines parties de cet article sont tirées de « Phosphate buffered saline. Sur Wikipedia, lencyclopédie gratuite. Extrait le 17 septembre 2008 de http://en.wikipedia.org/wiki/Phosphate_buffered_saline. » Cet article a été révisé pour sa précision scientifique et est utilisé conformément à la licence de documentation libre GNU (GFDL) de Wikipedia.