Hybridation fluorescente in situ (FISH)
Hybridation fluorescente in situ (FISH)
Quest-ce que FISH?
Comment fonctionne FISH?
À quoi sert FISH?
Combien de types de sondes pour FISH?
Nos services et produits?
Citations / Références?
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Quest-ce que FISH?
Lhybridation in situ par fluorescence (FISH) est une sorte de technique cytogénétique qui utilise des sondes fluorescentes liant des parties du chromosome pour montrer un haut degré de complémentarité de séquence. La microscopie fluorescente peut être utilisée pour savoir où la sonde fluorescente sest liée au chromosome. Cette technique offre un nouveau moyen pour les chercheurs de visualiser et de cartographier le matériel génétique dune cellule individuelle, y compris des gènes spécifiques ou des portions de gènes. Cest un outil important pour comprendre une variété danomalies chromosomiques et dautres mutations génétiques. Différente de la plupart des autres techniques utilisées pour létude des chromosomes, FISH na pas besoin dêtre effectuée sur les cellules qui se divisent activement, ce qui en fait une procédure très polyvalente.
Fig. 1 Schéma du principe de lexpérience FISH pour localiser un gène dans le noyau.
Comment fonctionne FISH?
FISH est utile, par exemple, pour aider un chercheur à identifier où un gène particulier se situe dans les chromosomes dun individu. Voici comment cela fonctionne:
o Faire une sonde complémentaire de la séquence connue . Lors de la fabrication de la sonde, étiquetez-la avec un marqueur fluorescent, par ex. fluorescéine, en incorporant des nucléotides auxquels est attaché le marqueur.
o Mettre les chromosomes sur une lame de microscope et les dénaturer.
o Dénaturer la sonde et lajouter à la lame de microscope, permettant à la sonde de shybrider à son complémentaire site.
o Laver lexcès de sonde et observer les chromosomes au microscope fluorescent. La sonde apparaîtra sous forme dun ou plusieurs signaux fluorescents dans le microscope, en fonction du nombre de sites auxquels elle peut shybrider.
Fig. 2 Les cinq étapes de base de poisson. (Oliveira et French 2005)
À quoi sert FISH?
FISH est largement utilisé pour plusieurs applications diagnostiques: identification danomalies numériques et structurelles, caractérisation des chromosomes marqueurs, suivi des effets de la thérapie, détection de la maladie résiduelle minime, suivi de lorigine des cellules après transplantation de moelle osseuse, identification de régions de délétion ou damplification, détection danomalies chromosomiques dans des cellules non en division ou différenciées en phase terminale, détermination de limplication de la lignée des cellules clonales, etc. De plus, il a de nombreuses applications en recherche: identification de réarrangements chromosomiques non aléatoires, identification du point de rupture moléculaire de translocation, identification de régions communément délétées, cartographie génique, caractérisation dhybrides de cellules somatiques, identification de gènes amplifiés, étude du mécanisme des réarrangements. FISH est également utilisé pour comparer les génomes de deux espèces biologiques pour en déduire des relations évolutives.
Combien de types de sondes pour FISH?
En général, les chercheurs utilisent trois types différents de sondes FISH, dont chacune a une application différente:
Les sondes spécifiques à un locus se lient à une région particulière dun chromosome. Ce type de sonde est utile lorsque les chercheurs ont isolé une petite partie dun gène et veulent déterminer sur quel chromosome se trouve le gène.
Les sondes à répétition alphoïde ou centromérique sont générées à partir de séquences répétitives trouvées au milieu de chaque chromosome. Les chercheurs utilisent ces sondes pour déterminer si un individu possède le nombre correct de chromosomes. Ces sondes peuvent également être utilisées en combinaison avec des «sondes spécifiques de locus» pour déterminer si un individu manque de matériel génétique dun chromosome particulier.
Les sondes chromosomiques entières sont en fait des collections de sondes plus petites, chacune se liant à une séquence différente le long la longueur dun chromosome donné. En utilisant plusieurs sondes marquées avec un mélange de différents colorants fluorescents, les scientifiques sont capables de marquer chaque chromosome dans sa propre couleur unique. La carte en couleur résultante du chromosome est connue sous le nom de caryotype spectral. Les sondes chromosomiques entières sont particulièrement utiles pour examiner les anomalies chromosomiques, par exemple, lorsquun morceau dun chromosome est attaché à lextrémité dun autre chromosome.
Nos services et produits:
Creative Biolabs offre une gamme complète de services personnalisés dhybridation in situ par fluorescence (FISH), de la conception de la sonde, de la préparation des chromosomes / cellules à linterprétation experte des résultats.
| A. | Préparation chromosomique / cellulaire: Nous pouvons vous aider à réaliser le chromosome cellulaire FISH (FISH sur interphase, métaphase et cellules cultivées), le chromosome tissulaire FISH (FISH sur formol-fixé, paraffine- tissus intégrés ou lames de cellules) et ARN-FISH (FISH pour étudier la localisation intracellulaire de lARN, le traitement de lARN, la quantification). Nous avons effectué de nombreux tests visant à améliorer lefficacité de la préparation des lames cytogénétiques et à augmenter les signaux FISH. Plusieurs modifications du protocole général ont abouti à une meilleure diffusion des chromosomes, une meilleure morphologie des chromosomes et des temps dhybridation plus courts, tout en produisant des signaux FISH plus brillants. |
| B . | Conception, étiquetage, purification et test des sondes: Nos sondes FISH sont des morceaux dADN synthétiques qui se couplent à un indicateur fluorescent, de sorte que les chromosomes ou les gènes auxquels ils se lient peuvent être directement visualisés sous notre analyse dimagerie système. Notre mode opératoire standard bien établi permet une optimisation efficace du marquage dune variété de sondes fluorescentes. De plus, nous pouvons fournir des services expérimentaux pour répondre à vos besoins particuliers. Des sondes personnalisées sont également disponibles. Le choix des sondes SpectrumOrange, SpectrumGreen ou SpectrumAqua directement ou indirectement marquées dépend de lutilisation et de la combinaison dautres fluorophores dans le test FISH.
o Sondes de peinture de chromosomes entiers (WPP) |
| C. | Hybridation in situ: nous pouvons optimiser les conditions dhybridation FISH et fournir une gamme complète de services FISH. |
| D. | Interprétation des résultats: Notre système danalyse dimagerie FISH se compose dun microscope à fluorescence, dune caméra à dispositif à couplage de charge («CCD») et dun logiciel danalyse dimagerie Les trois composants sont fournis par nos fournisseurs de composants avec des modifications internes. Grâce à lutilisation de sondes FISH, le système danalyse par imagerie permet aux médecins de détecter et de localiser la présence ou labsence de séquences dADN spécifiques dans les chromosomes. |
| E. | Pr Diagnostic énatal: Nos kits de détection de diagnostic prénatal optimisés offrent des technologies innovantes et des méthodes standard qui sont appliquées au diagnostic des troubles fœtaux.
o Trisomie (21/18/13/12/9/8) |
| F. | Diagnostic et pronostic du cancer: De nombreux kits de test de diagnostic du cancer sont disponibles dans notre société. Vous pouvez également personnaliser dautres sondes de diagnostic du cancer en fonction de vos besoins.
o Cancer de la vessie |
| G. | Réactifs pour FISH: Nos réactifs et solutions optimisés vous aideront à réaliser vos expériences FISH de manière plus fluide et plus efficace. |
| H. | Caractéristiques: Les avantages de nos services et produits sont les suivants:
o Simple, facile, rapide et reproductible |
Citations / Références
Exemples de sondes FISH:
Sonde de peinture du chromosome humain 1 (vert) |
Sonde de peinture du bras du chromosome humain 1 |
Sonde de peinture en bande terminale du chromosome humain 1 |
Sonde centromère du chromosome 3 humain |
Chromosome humain e 1 sondes subtelomères |
Signal dhybridation de la sonde du gène XIST humain ( rouge) |
| TABLEAU 1: Services FISH personnalisés | ||
| SERVICE | DESCRIPTION | Prix |
| Chromosome / Préparation des cellules | Nous pouvons vous aider à effectuer la cellule chromosome FISH (FISH sur interphase, métaphase et cellules cultivées) et chromosome tissulaire FISH (FISH sur lames de tissu ou de cellules fixées au formol, inclus en paraffine). | COMMANDE |
| Conception, étiquetage, purification et test des sondes | Notre la procédure standard dexploitation permet s optimisation efficace du marquage de diverses sondes fluorescentes. Des sondes personnalisées sont également disponibles. Le choix des sondes SpectrumOrange, SpectrumGreen ou SpectrumAqua directement étiquetées dépend de lutilisation et de la combinaison dautres fluorophores dans le test FISH. | ORDERING |
| Hybridation in situ | Nous avons optimisé les conditions dhybridation FISH et pouvons fournir toutes sortes de FISH service pour les chercheurs. | ORDERING |
| Interprétation des résultats | Notre système danalyse dimagerie FISH se compose dun microscope à fluorescence, dune caméra à dispositif à couplage de charge (« CCD ») et dun logiciel danalyse dimagerie. Les trois composants sont fournis par nos fournisseurs de composants avec Grâce à lutilisation de sondes FISH, le système danalyse dimagerie permet aux médecins de détecter et de localiser la présence ou labsence de séquences dADN spécifiques dans les chromosomes. | ORDERING |
Tous les services personnalisés répertoriés & sont destinés à la recherche uniquement, non destinés à un usage pharmaceutique, diagnostique, thérapeutique ou à toute utilisation humaine in vivo.