Protocols Online

Fosfaattipuskuroitu suolaliuos (lyhennetty nimellä PBS) on puskuriliuos, jota käytetään yleisesti biologisessa tutkimuksessa. Se on suolainen liuos, joka sisältää natriumkloridia, natriumfosfaattia ja (joissakin formulaatioissa) kaliumkloridia ja kaliumfosfaattia. Puskuri auttaa ylläpitämään vakiota pH: ta. Liuoksen osmolaarisuus ja ionipitoisuudet vastaavat yleensä ihmiskehon vastaavia (isotoninen).

Sovellukset

Cryosection kudoksesi vain kolmessa tunnissa Teomicsin Cryoglass ™ -tuotteella.

PBS: llä on monia käyttötarkoituksia, koska se on isotoninen ja myrkytön soluille. Sitä voidaan käyttää aineiden laimentamiseen. Sitä käytetään soluja sisältävien astioiden huuhteluun. PBS: ää voidaan käyttää laimennusaineena menetelmissä kuivata biomolekyylejä, koska sen sisällä olevat vesimolekyylit rakentuvat aineen (esimerkiksi proteiinin) ympärille ”kuivattaviksi” ja immobilisoitaviksi kiinteälle pinnalle. Aineeseen sitoutuva ohut vesikalvo estää denaturoitumisen tai muut konformaatiomuutokset. Karbonaattipuskureita voidaan käyttää samaan tarkoitukseen, mutta vähemmän tehokkaasti. PBS: ää voidaan käyttää vertailuspektrin mittaamiseen, kun mitataan proteiinin adsorptiota ellipsometriassa.

Lisäaineita voidaan käyttää funktion lisäämiseen. Esimerkiksi PBS: ää, jossa on EDTA: ta, käytetään myös kiinnittyneiden ja kasautuneiden solujen irrottamiseen. Kaksiarvoisia metalleja, kuten sinkkiä, ei kuitenkaan voida lisätä, koska se johtaa saostumiseen. Tämäntyyppisiin sovelluksiin suositellaan Goodin puskureita.

Valmistelu

PBS: n valmisteluun on monia eri tapoja. Jotkut formulaatiot eivät sisällä kaliumia, kun taas toiset sisältävät kalsiumia tai magnesiumia. Yksi yleisimmistä valmisteista on kuvattu alla.

10 litran 10x PBS -varasto voidaan valmistaa liuottamalla

• 800 g NaCl,
• 20 g KCl,
• 144 g Na2HPO4 · 2H2O
• 24 g KH2PO4
• 8 l tislattua vettä.

Täydellisen sekoittamisen jälkeen lisää lopullinen liuos 10 litraan. 10-kertaisen massan pH on noin 6,8, mutta laimennettuna 1x PBS: ään sen tulisi muuttua arvoon 7,4. Puskuriliuoksia tehtäessä on hyvä käytäntö mitata aina pH suoraan käyttämällä pH-mittaria. Tarvittaessa pH voidaan säätää kloorivetyhapolla tai natriumhydroksidilla.

Laimennuksen aikana saadun 1x PBS: n loppupitoisuuden tulisi olla 137 mM NaCl, 10 mM fosfaatti, 2,7 mM KCl ja pH 7.4.
Toinen valmiste kuvataan julkaisussa Sambrook, Fritsch and Maniatis, Molecular Cloning, Liite B.12 seuraavasti:

Valmista 1 litra 1X PBS: ää seuraavasti:

1. Aloita 800 ml: lla tislattua vettä:
2. Lisää 8 g NaCl: a.
3. Lisää 0,2 g KCl: ää.
4. Lisää 1,44 g Na2HPO4: ää. .
5. Lisää 0,24 g KH2PO4.
6. Säädä pH arvoon 7,4 HCl: lla.
7. Lisää tislattua vettä 1 litran kokonaistilavuuteen.

Annostele liuos eriin ja steriloi autoklaavissa (20 min, 121 ° C, nestekierto). Säilytä huoneenlämmössä.

1. Dulbecco, R. et ai. (1954): Plakin muodostuminen ja puhtaiden linjojen eristäminen poliomyeliittiviruksilla. Julkaisussa: J. Exp. Med. Voi. 99 (2), s. 167-182. PMID 13130792
2. Sambrook, Fritsch ja Maniatis (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2. painos, Cold Spring Harbour Laboratory Press, Cold Spring Harbour, New York, osa 3, liite B.12
3. Tämän artikkelin osat ovat ”Fosfaattipuskuroitua suolaliuosta. Wikipediassa, vapaassa tietosanakirjassa. Haettu 17. syyskuuta 2008 osoitteesta http://en.wikipedia.org/wiki/Phosphate_buffered_saline.” Tämän artikkelin tieteellinen tarkkuus on tarkistettu, ja sitä käytetään Wikipedian GNU Free Documentation License (GFDL) -standardin mukaisesti.