Fluorescent in situ -hybridisaatio (FISH)
Fluoresoiva in situ -hybridisaatio (FISH)
mikä on KALA?
Kuinka FISH toimii?
Mihin FISHia käytetään?
Kuinka monta tyyppiä FISH-koettimia?
Palvelumme ja tuotteemme?
Sitaatit / viitteet?
********************************************* *************************************************** **************************************************
Mikä on KALA?
Fluoresenssi in situ -hybridisaatio (FISH) on eräänlainen sytogeneettinen tekniikka, jossa käytetään fluoresoivia koettimia, jotka sitovat kromosomin osia sekvenssin suuren komplementaarisuuden osoittamiseksi. Fluoresenssikemikroskopiaa voidaan käyttää selvittämään, mihin fluoresoiva koetin sitoutui kromosomiin. Tämä tekniikka tarjoaa tutkijoille uuden tavan visualisoida ja kartoittaa yksittäisen solun geneettinen materiaali, mukaan lukien spesifiset geenit tai geenien osuudet. Se on tärkeä työkalu erilaisten kromosomaalisten poikkeavuuksien ja muiden geneettisten mutaatioiden ymmärtämiseen. Erilainen kuin useimmat muut kromosomitutkimuksessa käytettävät tekniikat, FISH: ää ei tarvitse suorittaa aktiivisesti jakautuvilla soluilla, mikä tekee siitä erittäin monipuolisen menettelyn.
Kuva 1 Kaavio FISH-kokeen periaatteesta geenin lokalisoimiseksi ytimessä.
Kuinka FISH toimii?
FISH on hyödyllinen esimerkiksi auttamaan tutkijaa tunnistamaan, mihin tietty geeni kuuluu yksilön kromosomeihin. Näin se toimii:
o Tee koetin, joka täydentää tunnettua sekvenssiä . Kun valmistat koettimen, merkitse se fluoresoivalla markkerilla, esim. fluoresiini, sisällyttämällä nukleotideja, joihin markkeri on kiinnitetty.
o Aseta kromosomit mikroskooppialustalle ja denaturoi ne.
o Denaturoi koetin ja lisää se mikroskoopin lasille, jolloin koetin hybridisoituu komplementaariseen. o. Pese ylimääräinen koetin ja tarkkaile kromosomeja fluoresoivalla mikroskoopilla. Koetin näyttää yhtenä tai useampana fluoresoivana signaalina mikroskoopissa sen mukaan, mihin sivustoihin se voi hybridisoitua.
Kuva 2 Viisi perusvaihetta FISH. (Oliveira ja Ranska 2005)
Mihin FISHia käytetään?
deleetio- tai monistumisalueiden tunnistaminen, kromosomipoikkeavuuksien havaitseminen jakautumattomissa tai terminaalisesti erilaistuneissa soluissa, klonaalisten solujen sukututkimuksen määrittäminen jne. Lisäksi sillä on monia sovelluksia tutkimuksessa: ei-satunnaisten kromosomien uudelleenjärjestelyjen tunnistaminen, translokaation molekyylien rikkoutumispisteiden tunnistaminen, yleisesti poistettujen alueiden tunnistaminen, geenikartoitus, somaattisten solujen hybridien karakterisointi, monistettujen geenien tunnistaminen, uudelleenjärjestelyjen mekanismien tutkiminen. FISH: ää käytetään myös kahden biologisen lajin genomien vertaamiseen evoluutioyhteyksien päättelemiseksi.
Kuinka monta tyyppiä FISH-koettimia?
Yleensä tutkijat käyttävät kolmentyyppisiä FISH-koettimia, joista kullakin on erilainen sovellus:
Locus-spesifiset koettimet sitoutuvat tiettyyn kromosomin alueeseen. Tämäntyyppinen koetin on hyödyllinen, kun tutkijat ovat eristäneet pienen osan geenistä ja haluavat määrittää, missä kromosomissa geeni sijaitsee.
Alphoid- tai centromeric-toistuvat koettimet muodostetaan toistuvista sekvensseistä, jotka löytyvät kunkin kromosomin keskeltä. Tutkijat käyttävät näitä koettimia selvittääkseen, onko yksilöllä oikea määrä kromosomeja. Näitä koettimia voidaan käyttää myös yhdessä ”lokusspesifisten koettimien” kanssa sen selvittämiseksi, puuttuuko yksilöltä geneettistä materiaalia tietystä kromosomista.
Koko kromosomikoettimet ovat itse asiassa kokoelmia pienemmistä koettimista, joista jokainen sitoutuu eri sekvenssiin tietyn kromosomin pituus. Käyttämällä useita koettimia, jotka on merkitty erilaisten fluoresoivien väriaineiden seoksella, tutkijat pystyvät merkitsemään jokaisen kromosomin omalla ainutlaatuisella värillään. Tuloksena oleva kromosomin täysvärikartta tunnetaan spektrikariotyypinä. Koko kromosomikoettimet ovat erityisen hyödyllisiä tutkittaessa kromosomaalisia poikkeavuuksia, esimerkiksi kun yksi kromosomin osa on kiinnitetty toisen kromosomin päähän.
Palvelumme ja tuotteemme:
Creative Biolabs tarjoaa täyden valikoiman mukautettuja fluoresenssi-in situ -hybridisaatiopalveluja (FISH) koettimen suunnittelusta, kromosomin / solun valmistelusta asiantuntijoiden tulosten tulkintaan.
| A. | Kromosomi / solujen valmistelu: Voimme auttaa sinua suorittamaan solukromosomin FISH (FISH interfaasi-, metafaasi- ja viljeltyjen solujen), kudoskromosomin FISH (FISH formaliinikiinnitteisillä, parafiini- kudoksen tai solujen diat) ja RNA-FISH (FISH solunsisäisen RNA-paikannuksen, RNA-prosessoinnin, kvantitoinnin tutkimiseen). Teimme lukuisia testejä, joiden tarkoituksena oli parantaa sytogeneettisten objektilasien valmistuksen tehokkuutta ja lisätä FISH-signaaleja. Useat yleisen protokollan muokkaukset johtivat parempaan kromosomien leviämiseen, parempaan kromosomimorfologiaan ja lyhyempiin hybridisaatioihin samalla, kun ne tuottivat kirkkaampia FISH-signaaleja. |
| B . | Koettimien suunnittelu, merkinnät, puhdistus ja testaus: FISH-koettimemme ovat synteettisiä DNA-kappaleita, jotka yhdistyvät fluoresoivalla indikaattorilla, jotta niiden kromosomit tai geenit, joihin ne sitoutuvat, voidaan suoraan visualisoida kuvantamisanalyysissämme. järjestelmään. Vakiintunut vakiotoimintamenettelymme mahdollistaa useiden fluoresoivien koettimien merkintöjen tehokkaan optimoinnin. Voimme myös tarjota kokeellisia palveluja vastaamaan erityistarpeitasi. Myös räätälöityjä koettimia on saatavana. Suoraan tai epäsuorasti leimattujen SpectrumOrange-, SpectrumGreen- tai SpectrumAqua-koettimien valinta riippuu muiden fluoroforien käytöstä ja yhdistelmästä FISH-määrityksessä.
o Kokonaiset kromosomimaalauskoettimet (WPP) |
| C. | In situ -hybridisaatio: Voimme optimoida FISH-hybridisaatio-olosuhteet ja tarjota täyden valikoiman FISH-palveluita. |
| D. | Tulosten tulkinta: FISH-kuvankäsittelyanalyysijärjestelmämme koostuu fluoresoivasta mikroskoopista, latauskytketyn laitteen (”CCD”) kamerasta ja kuvankäsittelyanalyysiohjelmistosta. Komponenttitoimittajamme toimittavat kaikki kolme komponenttia sisäisillä muutoksilla. FISH-koettimien avulla kuvantamisanalyysijärjestelmä antaa lääkäreille mahdollisuuden havaita ja paikantaa spesifisten DNA-sekvenssien läsnäolo tai puuttuminen kromosomeissa. |
| E. | Pr enataalidiagnoosi: Optimoidut prenataalisen diagnoosin havaitsemispakettimme tarjoavat innovatiivisia tekniikoita ja standardimenetelmiä, joita käytetään sikiöhäiriöiden diagnosointiin.
o Trisomia (21/18/13/12/9/8) |
| F. | Syöpädiagnoosi ja ennuste: Yrityksessämme on monia syöpädiagnoosin testaussarjoja. Voit myös räätälöidä muita syöpädiagnostiikkaantureita tarpeen mukaan.
o Virtsarakon syöpä |
| G. | KALA-reagenssit: Optimoidut reagenssimme ja ratkaisumme auttavat sinua suorittamaan FISH-kokeesi sujuvammin ja tehokkaammin. |
| H. | Ominaisuudet: Palveluidemme ja tuotteidemme edut ovat seuraavat:
o Yksinkertainen, helppo, nopea ja toistettavissa |
Viitteet / viitteet
FISH-koettimen näytteet:
Ihmisen kromosomin 1 maalaustunnistin (vihreä) |
Ihmisen kromosomin 1 käsivarsien maalauskenno |
Ihmisen kromosomin 1 terminaalikaistamaalauskoetin |
Ihmisen kromosomi 3 -sentromeerikoetin |
Ihmisen kromosomi e 1 subtelomeerikoettimet |
Ihmisen XIST-geenikoettimen hybridisaatiosignaali ( punainen) |
| TAULUKKO 1: Mukautetut kalapalvelut | ||
| PALVELU | KUVAUS | Hinta |
| Kromosomien / solujen valmistelu | Voimme auttaa sinua suorittamaan soluja kromosomi FISH (FISH interfaasi-, metafaasi- ja viljellyissä soluissa) ja kudoskromosomi FISH (FISH formaliiniin kiinnitetyssä, parafiiniin upotetussa kudoksessa tai solulaseissa). | TILAUS |
| Koettimien suunnittelu, merkinnät, puhdistus ja testaus | Vakiintunut tavanomainen toimintatapa sallii s fluoresoivien koettimien merkintöjen tehokas optimointi. Myös räätälöityjä koettimia on saatavana. Suoraan leimattujen SpectrumOrange-, SpectrumGreen- tai SpectrumAqua-koettimien valinta riippuu muiden fluoroforien käytöstä ja yhdistelmästä FISH-määrityksessä. | TILAUS |
| Hybridisaatio tilanteessa | Olemme optimoineet FISH-hybridisaatio-olosuhteet ja pystymme tarjoamaan kaikenlaisia KALA palvelu tutkijoille. | TILAUS |
| Tulosten tulkinta | FISH-kuvankäsittelyanalyysijärjestelmämme koostuu fluoresoivasta mikroskoopista, latauskytketyn laitteen (”CCD”) kamerasta ja kuvausanalyysiohjelmistosta. Komponenttitoimittajamme toimittavat kaikki kolme komponenttia sisäiset muutokset. FISH-koettimien avulla kuvantamisanalyysijärjestelmä antaa lääkäreille mahdollisuuden havaita ja paikantaa spesifisten DNA-sekvenssien läsnäolo tai puuttuminen kromosomeissa. | Tilaaminen |
Kaikki luetellut räätälöidyt palvelut & tuotteet ovat tarkoitettu vain tutkimuskäyttöön, niitä ei ole tarkoitettu farmaseuttiseen, diagnostiseen, terapeuttiseen tai mihinkään in vivo -käyttöön.