On tärkeää, että tiedät, mitä tiettyä C57BL / 6-alijärjestelmää käytät, jotta voit käyttää kokeissasi sopivia ohjausobjekteja ja tulkita tietojasi oikein! Koska C.C. Little (The Jackson Laboratoryn perustaja) tuotti alun perin C57BL-sisäsiirtokannan 1920-luvulta 1930-luvulle, sisäsiitososasta C57BL / 6 tuli yleisimmin käytetty hiirikanta biolääketieteellisessä tutkimuksessa. Sisäisten C57BL / 6-hiirten suosio johti monien pesäkkeiden perustamiseen eri myyjiin ja korkeakouluihin ympäri maailmaa.

C57BL / 6-alajunat

Et ehkä tiedä tätä: jokainen kun uutta C57BL / 6-pesäkettä ylläpidetään erillään olemassa olevasta siirtomaasta 20 tai useamman sukupolven ajan, siitä tulee uusi C57BL / 6-alikanta. Sukupolvet ovat kumulatiivisia, joten jos kukin kahdesta erillisestä pesäkkeestä kasvaa 10 sukupolven ajan (~ 2-3 vuotta), ne ovat 20 sukupolven päässä toisistaan ja erilaisilla alajuoksuilla, joilla on mahdollisesti erilaiset fenotyypit. Osana kannan nimikkeistöä lisätään laboratorion koodit alajännityksen nimeksi. C57BL / 6J on vanhempien alikanta; ”J” on Jackson Laboratoryn laboratoriokoodi. Siksi ei ole ”C57BL / 6” -hiirten lähdettä; kullekin alajohdolle on aina annettu pidempi nimitys, joka osoittaa instituutin tai laboratorion, joka ylläpitää eri pesäkkeitä.

C57BL / 6-alajohdot eivät ole samat!

Kun uusi C57BL / 6-alajohto on vakiintunut, spontaaneja mutaatioita syntyy sekä alkuperäisessä että uudessa siirtomassa. Osa näistä mutaatioista leviää pesäkkeen läpi geneettisen ajautumisen kautta ja muuttuu kiinteäksi (homotsygoottinen kaikissa hiirissä). Mitä pidempään yksittäiset alajohdot erotetaan toisistaan, sitä suurempi on niiden välisten geneettisten erojen määrä. Nämä geneettiset erot voivat johtaa fenotyyppisiin eroihin.

C57BL / 6J vs. C57BL / 6N

Vuonna 1951 C57BL / 6J-hiiret lähetettiin National Institutes of Healthiin (NIH), missä perustettiin siirtomaa, jota kutsuttiin nimellä C57BL / 6N. Myöhemmin C57BL / 6N-pesäkkeestä on johdettu monia alajohtoja. Mutaatio, joka aiheuttaa täplällisen verkkokalvon rappeutumisen, tunnetaan nimellä Crb1rd8, havaittiin olevan homotsygoottinen kaikissa C57BL / 6N-sukulaisalaryhmissä, mutta sitä ei ole läsnä C57BL / 6J-alikannassa. Lisäksi International Knockout Mouse Consortium (IKMC) -fenotyyppikeskuksista kerätyt tiedot ovat havainneet lukuisia fenotyyppisiä eroja C57BL / 6J- ja C57BL / 6N-alajunien välillä.

Tietämättömyysloukkuun pudottamisen vaarat

Voi olla vakavia seurauksia, jos et ole täysin tietoinen geneettisestä taustasta (kanta ja alikanta) tai kokeellisista hiiristäsi. Et olisi ensimmäinen tutkija, joka putoaa tähän ansaan. Kun valitset väärän kontrollikannan, sinulla on suuri riski tulkita tietoja väärin, tehdä virheellisiä johtopäätöksiä ja viivästyttää tutkimusohjelmaa vakavasti.

Blogimerkkimme ”Miksi Harvardin tutkimuslaboratoriosta kesti 2 vuotta palata tutkimukseen” kuvaa, kuinka tutkimuslaboratorio yhdisti vahingossa immuunipuutosfenotyypin knockout-alleeliin, vaikka se itse asiassa johtui mutaatioon tietyssä C57BL / 6-alajohdossa, tyrmäys ylitettiin takaisin. Virhe havaittiin, kun pudotusmalli ristitettiin toisen toimittajan C57BL / 6-alajuoksulle ja fenotyyppi menetettiin. Suurimman osan ajasta, vaivaa, ja resurssit, joiden avulla selvitettiin, miksi joukkue ei pystyisi toistamaan aiempia tuloksia, olisi voitu säästää, jos kirjoittajat olisivat käyttäneet kontrollihiiriä, joilla on sama geneettinen tausta – kuin mitä käytettiin kiinnostavan pudotusmallin ylittämiseen.

Onko tämä geeni suojaava vai myrkyllinen?

Toinen merkittävä esimerkki tulee laboratoriosta National Heart, Lung and Blood Institute (osa NIH: ta) .Testauksen jälkeen Mapk9 (Jnk2) -poistokohdan vaikutukset asetaminofeeniin aiheuttama maksavaurio käyttämällä C57BL / 6J: tä villityypin kontrollina , tulokset olivat odotusten vastaisia. Toistettaessa C57BL / 6NJ: tä (C57BL / 6N, tuotu JAX: iin NIH: lta vuonna 2005) villityypin kontrollina, Mapk9-pudotusten fenotyyppi putosi täsmälleen C57BL / 6J: n ja C57BL / 6NJ: n fenotyypin väliin (katso kuva).

Tutkijat joutuivat tilanteeseen, jossa he pystyivät tulkitsemaan tietojaan kahdella vastakkaisella tavalla riippuen käytetystä kontrollista. Jos kontrollina käytettiin C57BL / 6J: tä, tiedot osoittivat, että MAPk9 oli maksan suojaava. Jos he käyttivät kontrollina C57BL / 6NJ: tä, MAPK9 näytti olevan maksatoksinen.

Kuva 1. Tietojen johtopäätökset vaihtelevat kontrollikannan valinnan mukaan. Hiiriä käsiteltiin asetaminofeenilla (APAP, 300 mg / kg vatsakalvonsisäisesti). Maksavaurio arvioitiin 24 tuntia hoidon jälkeen mittaamalla seerumin alaniiniaminotransferaasin (ALT) aktiivisuus. geeni oli maksatoksinen.Ajattele kuitenkin, kuinka helposti nämä tiedot olisi voitu tulkita väärin ja kuinka usein tällaiset virheet jäävät kokonaan väliin, mikä johtaa toistamattomiin tuloksiin!

Siksi varoitathan ja varmista, että tiedät paitsi sisäisen kannan myös kokeissa käyttämiesi hiirien alajoukot, jotta valitset oikeat kontrollit ja tuotat luotettavaa merkityksellistä tietoa. Muista, että C57BL / 6-hiiren kantaa ei ole, sillä on aina pidempi nimi! >