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- Preparación
Solución salina tamponada con fosfato (abreviado como PBS) es una solución tampón comúnmente utilizada en la investigación biológica. Es una solución salada que contiene cloruro de sodio, fosfato de sodio y (en algunas formulaciones) cloruro de potasio y fosfato de potasio. El tampón ayuda a mantener un pH constante. La osmolaridad y las concentraciones de iones de la solución suelen coincidir con las del cuerpo humano (isotónica).
Aplicaciones
Crioseccione su tejido en solo tres horas con Cryoglass ™ de Teomics. PBS tiene muchos usos porque es isotónico y no tóxico para las células. Puede usarse para diluir sustancias. Se utiliza para enjuagar recipientes que contienen células. El PBS se puede utilizar como diluyente en métodos para secar biomoléculas, ya que las moléculas de agua que contiene se estructurarán alrededor de la sustancia (proteína, por ejemplo) que se «secará» e inmovilizará en una superficie sólida. La fina película de agua que se une a la sustancia evita la desnaturalización u otros cambios conformacionales. Los tampones de carbonato pueden usarse para el mismo propósito pero con menos efectividad. El PBS se puede usar para tomar un espectro de referencia al medir la adsorción de proteínas en elipsometría.
Se pueden usar aditivos para agregar función. Por ejemplo, PBS con EDTA también se usa para desconectar las células adheridas y agrupadas. Sin embargo, no se pueden agregar metales divalentes como el zinc, ya que esto provocaría precipitación. Para este tipo de aplicaciones, se recomiendan los búferes de Good.
Preparación
Hay muchas formas diferentes de preparar PBS. Algunas formulaciones no contienen potasio, mientras que otras contienen calcio o magnesio. Una de las preparaciones más comunes se describe a continuación.
Se puede preparar una reserva de 10 litros de 10x PBS disolviendo
- 800 g de NaCl,
- 20 g KCl,
- 144 g Na2HPO4 · 2H2O
- 24 g KH2PO4
- 8 L de agua destilada.
Después de completar la mezcla, rellene la solución final a 10 L. El pH del stock 10X será aproximadamente 6,8, pero cuando se diluya a 1x PBS debería cambiar a 7,4. Al preparar soluciones tampón, es una buena práctica medir siempre el pH directamente usando un medidor de pH. Si es necesario, el pH se puede ajustar con ácido clorhídrico o hidróxido de sodio.
En la dilución, el 1x PBS resultante debe tener una concentración final de 137 mM de NaCl, 10 mM de fosfato, 2,7 mM de KCl y un pH de 7.4.
Se describe otra preparación en Molecular Cloning de Sambrook, Fritsch y Maniatis, Apendix B.12 como sigue:
Para 1 litro de 1X PBS, preparar de la siguiente manera:
- Comience con 800 ml de agua destilada:
- Agregue 8 g de NaCl.
- Agregue 0.2 g de KCl.
- Agregue 1.44 g de Na2HPO4 .
- Agregue 0.24 g de KH2PO4.
- Ajuste el pH a 7.4 con HCl.
- Agregue agua destilada hasta un volumen total de 1 litro.
Dispensar la solución en alícuotas y esterilizar en autoclave (20 min, 121 ° C, ciclo líquido). Almacenar a temperatura ambiente.
- Dulbecco, R. et al. (1954): Formación de placa y aislamiento de líneas puras con virus de poliomielitis. En: J. Exp. Medicina. vol. 99 (2), págs. 167-182. PMID 13130792
- Sambrook, Fritsch y Maniatis (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2a ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, Nueva York, volumen 3, apéndice B.12
- Partes de este artículo son de «Solución salina tamponada con fosfato. En Wikipedia, la enciclopedia libre. Obtenido el 17 de septiembre de 2008, de http://en.wikipedia.org/wiki/Phosphate_buffered_saline.» Este artículo ha sido revisado para comprobar su precisión científica y se utiliza de acuerdo con la Licencia de documentación libre GNU (GFDL) de Wikipedia.