Hibridación Fluorescente In Situ (FISH)
Hibridación Fluorescente In Situ (FISH)
¿Qué es FISH?
¿Cómo funciona FISH?
¿Para qué se utiliza FISH?
¿Cuántos tipos de sondas para FISH?
¿Nuestros servicios y productos?
¿Citas / referencias?
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¿Qué es FISH?
La hibridación fluorescente in situ (FISH) es un tipo de técnica citogenética que utiliza sondas fluorescentes que se unen a partes del cromosoma para mostrar un alto grado de complementariedad de secuencia. La microscopía de fluorescencia se puede utilizar para averiguar dónde se une la sonda fluorescente al cromosoma. Esta técnica proporciona una forma novedosa para que los investigadores visualicen y mapeen el material genético en una célula individual, incluidos genes específicos o porciones de genes. Es una herramienta importante para comprender una variedad de anomalías cromosómicas y otras mutaciones genéticas. A diferencia de la mayoría de las otras técnicas utilizadas para el estudio de los cromosomas, FISH no necesita realizarse en células que se están dividiendo activamente, lo que lo convierte en un procedimiento muy versátil.
Fig. 1 Esquema del principio del experimento FISH para localizar un gen en el núcleo.
¿Cómo funciona FISH?
FISH es útil, por ejemplo, para ayudar a un investigador a identificar dónde se encuentra un gen en particular dentro de los cromosomas de un individuo. Así es como funciona:
o Hacer una sonda complementaria a la secuencia conocida . Al hacer la sonda, márquela con un marcador fluorescente, p. Ej. fluoresceína, mediante la incorporación de nucleótidos que tienen el marcador unido a ellos.
o Coloque los cromosomas en un portaobjetos de microscopio y desnaturalice.
o Desnaturalice la sonda y agréguela al portaobjetos del microscopio, permitiendo que la sonda hibride con su sitio.
o Lave el exceso de sonda y observe los cromosomas bajo un microscopio fluorescente. La sonda se mostrará como una o más señales fluorescentes en el microscopio, según la cantidad de sitios con los que pueda hibridar.
Fig. 2 Los cinco pasos básicos de PESCADO. (Oliveira y French 2005)
¿Para qué se utiliza FISH?
FISH se utiliza ampliamente para varias aplicaciones de diagnóstico: identificación de anomalías numéricas y estructurales, caracterización de cromosomas marcadores, seguimiento de los efectos de la terapia, detección de enfermedad residual mínima, seguimiento del origen de las células después del trasplante de médula ósea, identificación de regiones de deleción o amplificación, detección de anomalías cromosómicas en células que no se dividen o diferenciadas terminalmente, determinación de la implicación del linaje de células clonales, etc. Además, tiene muchas aplicaciones en la investigación: identificación de reordenamientos cromosómicos no aleatorios, identificación del punto de ruptura molecular de translocación, identificación de regiones comúnmente eliminadas, mapeo de genes, caracterización de híbridos de células somáticas, identificación de genes amplificados, estudio del mecanismo de reordenamientos. FISH también se usa para comparar los genomas de dos especies biológicas para deducir relaciones evolutivas.
¿Cuántos tipos de sondas para FISH?
Generalmente, los investigadores utilizan tres tipos diferentes de sondas FISH, cada una de las cuales tiene una aplicación diferente:
Las sondas específicas de locus se unen a una región particular de un cromosoma. Este tipo de sonda es útil cuando los investigadores han aislado una pequeña porción de un gen y quieren determinar en qué cromosoma se encuentra el gen.
Las sondas repetidas alfoides o centroméricas se generan a partir de secuencias repetitivas que se encuentran en el medio de cada cromosoma. Los investigadores utilizan estas sondas para determinar si un individuo tiene el número correcto de cromosomas. Estas sondas también se pueden usar en combinación con «sondas específicas de locus» para determinar si a un individuo le falta material genético de un cromosoma en particular.
Las sondas de cromosomas completos son en realidad colecciones de sondas más pequeñas, cada una de las cuales se une a una secuencia diferente a lo largo de la longitud de un cromosoma dado. Usando múltiples sondas marcadas con una mezcla de diferentes tintes fluorescentes, los científicos pueden etiquetar cada cromosoma en su propio color único. El mapa resultante a todo color del cromosoma se conoce como cariotipo espectral. Las sondas de cromosomas completos son particularmente útiles para examinar anomalías cromosómicas, por ejemplo, cuando una parte de un cromosoma está adherida al extremo de otro cromosoma.
Nuestros servicios y productos:
Creative Biolabs ofrece una gama completa de servicios personalizados de hibridación in situ de fluorescencia (FISH) desde el diseño de la sonda, la preparación de cromosomas / células hasta la interpretación experta de resultados.
| A. | Preparación de cromosomas / células: podemos ayudarlo a realizar FISH del cromosoma celular (FISH en interfase, metafase y células cultivadas), FISH del cromosoma de tejido (FISH en parafina fija portaobjetos de tejido o células incrustados) y RNA-FISH (FISH para estudiar la localización, el procesamiento y la cuantificación del RNA intracelular). Realizamos numerosas pruebas destinadas a mejorar la eficiencia de la preparación de portaobjetos citogenéticos y aumentar las señales FISH. Varias modificaciones del protocolo general dieron como resultado una mejor propagación de los cromosomas, una mejor morfología de los cromosomas y tiempos de hibridación más cortos, a la vez que produjeron señales FISH más brillantes. |
| B . | Diseño, etiquetado, purificación y prueba de sondas: Nuestras sondas FISH son piezas sintéticas de ADN que se acoplan con un indicador fluorescente, de modo que los cromosomas o genes a los que se unen se pueden visualizar directamente bajo nuestro análisis de imágenes. sistema. Nuestro procedimiento operativo estándar bien establecido permite una optimización eficiente del etiquetado de una variedad de sondas fluorescentes. Además, podemos proporcionar servicios experimentales para satisfacer sus necesidades especiales. También se encuentran disponibles sondas personalizadas. La elección de las sondas SpectrumOrange, SpectrumGreen o SpectrumAqua marcadas directa o indirectamente depende del uso y combinación de otros fluoróforos en el ensayo FISH.
o Sondas de pintura de cromosomas completos (WPP) |
| C. | Hibridación in situ: podemos optimizar las condiciones de hibridación FISH y proporcionar una gama completa de servicios FISH. |
| D. | Interpretación de los resultados: Nuestro sistema de análisis de imágenes FISH consta de un microscopio fluorescente, una cámara de dispositivo de carga acoplada («CCD») y un software de análisis de imágenes Los tres componentes los proporcionan nuestros proveedores de componentes con modificaciones internas. Mediante el uso de sondas FISH, el sistema de análisis de imágenes permite a los médicos detectar y localizar la presencia o ausencia de secuencias de ADN específicas en los cromosomas. |
| E. | Pr Diagnóstico enatal: nuestros kits de detección de diagnóstico prenatal optimizados ofrecen tecnologías innovadoras y métodos estándar que se aplican al diagnóstico de trastornos fetales.
o Trisomía (21/18/13/12/9/8) |
| F. | Diagnóstico y pronóstico del cáncer: nuestra empresa dispone de muchos kits de pruebas para el diagnóstico del cáncer. También puede personalizar otras sondas de diagnóstico de cáncer según sus necesidades.
o Cáncer de vejiga |
| G. | Reactivos para FISH: Nuestros reactivos y soluciones optimizados lo ayudarán a realizar sus experimentos FISH de manera más fluida y eficiente. |
| H. | Características: Las ventajas de nuestros servicios y productos son las siguientes:
o Sencillo, fácil, rápido y repetible |
Citas / Referencias
Ejemplos de sonda FISH:
Sonda de pintura del cromosoma 1 humano (verde) |
Sonda de pintura del brazo del cromosoma 1 humano |
Sonda de pintura de banda terminal del cromosoma 1 humano |
Sonda del centrómero del cromosoma 3 humano |
Cromosoma humano e 1 subtelómero sondas |
Señal de hibridación de la sonda del gen XIST humano ( rojo) |
| TABLA 1: Servicios FISH personalizados | ||
| SERVICIO | DESCRIPCIÓN | Precio |
| Preparación de células / cromosomas | Podemos ayudarlo a realizar cromosoma FISH (FISH en interfase, metafase y células cultivadas) y cromosoma de tejido FISH (FISH en portaobjetos de células o tejido embebido en parafina y fijado con formalina). | PEDIDOS |
| Diseño, etiquetado, purificación y prueba de sondas | Nuestro bien establecido El procedimiento operativo estándar permite s optimización eficiente del etiquetado de una variedad de sondas fluorescentes. También se encuentran disponibles sondas personalizadas. La elección de las sondas SpectrumOrange, SpectrumGreen o SpectrumAqua marcadas directamente depende del uso y la combinación de otros fluoróforos en el ensayo FISH. | PEDIDOS |
| Hibridación in situ | Hemos optimizado las condiciones de hibridación de FISH y podemos proporcionar todo tipo de FISH servicio para investigadores. | PEDIDOS |
| Interpretación de resultados | Nuestro sistema de análisis de imágenes FISH consta de un microscopio fluorescente, una cámara con dispositivo de carga acoplada («CCD») y software de análisis de imágenes. Nuestros proveedores de componentes proporcionan los tres componentes con modificaciones internas. Mediante el uso de sondas FISH, el sistema de análisis de imágenes permite a los médicos detectar y localizar la presencia o ausencia de secuencias de ADN específicas en los cromosomas. | PEDIDOS |
Todos los servicios personalizados enumerados & Los productos son para uso exclusivo en investigación, no para uso farmacéutico, diagnóstico, terapéutico o in vivo en humanos.