Protokoll online

Fosfatbuffrad saltlösning (förkortat som PBS) är en buffertlösning som vanligtvis används i biologisk forskning. Det är en salt lösning som innehåller natriumklorid, natriumfosfat och (i vissa formuleringar) kaliumklorid och kaliumfosfat. Bufferten hjälper till att upprätthålla ett konstant pH. Osmolaritets- och jonkoncentrationerna i lösningen matchar vanligtvis människokroppens (isotoniska).

Applikationer

Kryosektion din vävnad på bara tre timmar med Cryoglass ™ från Teomics.

PBS har många användningsområden eftersom det är isotoniskt och giftfritt för celler. Den kan användas för att späda ut ämnen. Den används för att skölja behållare som innehåller celler. PBS kan användas som ett utspädningsmedel i metoder för att torka biomolekyler, eftersom vattenmolekyler i den kommer att struktureras kring ämnet (till exempel protein) för att ”torkas” och immobiliseras till en fast yta. Den tunna vattenfilmen som binder till ämnet förhindrar denaturering eller andra konformationsförändringar. Karbonatbuffertar kan användas för samma ändamål men med mindre effektivitet. PBS kan användas för att ta ett referensspektrum vid mätning av proteinadsorptionen i ellipsometri.

Tillsatser kan användas för att lägga till funktion. Till exempel används PBS med EDTA också för att koppla bort fästa och klumpade celler. Divalenta metaller som zink kan dock inte tillsättas eftersom detta kommer att resultera i utfällning. För dessa typer av applikationer rekommenderas Goods buffertar.

Förberedelse

Det finns många olika sätt att förbereda PBS. Vissa formuleringar innehåller inte kalium, medan andra innehåller kalcium eller magnesium. En av de vanligaste beredningarna beskrivs nedan.

Ett 10 liters lager av 10x PBS kan framställas genom upplösning

• 800 g NaCl,
• 20 g KCl,
• 144 g Na2HPO4 · 2H2O
• 24 g KH2PO4
• 8 L destillerat vatten.

Efter fullständig blandning fyller du på den slutliga lösningen till 10 L. pH-värdet för 10X-beståndet är cirka 6,8, men när det späds till 1x PBS bör det ändras till 7,4. direkt med en pH-mätare. Vid behov kan pH justeras med saltsyra eller natriumhydroxid.

Vid utspädning bör den resulterande 1x PBS ha en slutlig koncentration på 137 mM NaCl, 10 mM fosfat, 2,7 mM KCl och ett pH på 7.4.
Ett annat preparat beskrivs i Molecular Cloning av Sambrook, Fritsch och Maniatis, Appendix B.12 enligt följande:

För 1 liter 1X PBS, förbered dig enligt följande:

1. Börja med 800 ml destillerat vatten:
2. Tillsätt 8 g NaCl.
3. Tillsätt 0,2 g KCl.
4. Tillsätt 1,44 g Na2HPO4 .
5. Tillsätt 0,24 g KH2PO4.
6. Justera pH till 7,4 med HCl.
7. Tillsätt destillerat vatten till en total volym på 1 liter.

Dosera lösningen i alikvoter och sterilisera genom autoklavering (20 min, 121 ° C, vätskecykel). Förvara vid rumstemperatur.

1. Dulbecco, R. et al. (1954): Plackbildning och isolering av rena linjer med poliomyelitvirus. I: J. Exp. Med. vol. 99 (2), sid. 167-182. PMID 13130792
2. Sambrook, Fritsch och Maniatis (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbour, New York, volym 3, bilaga B.12
3. Delar av denna artikel är från ”Fosfatbuffrad saltlösning. I Wikipedia, det fria encyklopedin. Hämtad 17 september 2008 från http://en.wikipedia.org/wiki/Phosphate_buffered_saline.” Denna artikel har granskats för vetenskaplig noggrannhet och används i enlighet med Wikipedias GNU Free Documentation License (GFDL).