Fluorescerande in situ-hybridisering (FISH)
Fluorescerande in situ-hybridisering (FISH)
Vad är FISH?
Hur fungerar FISH?
Vad används FISH till?
Hur många typer av sonder för FISH?
Våra tjänster och produkter?
Citat / referenser?
******************************************* ************************************************* *************************************************
Vad är FISK?
Fluorescens in situ hybridisering (FISH) är en typ av cytogenetisk teknik som använder fluorescerande sonder som binder delar av kromosomen för att visa en hög grad av sekvenskomplementaritet. Fluorescensmikroskopi kan användas för att ta reda på var den fluorescerande sonden binds till kromosomen. Denna teknik ger forskare ett nytt sätt att visualisera och kartlägga det genetiska materialet i en enskild cell, inklusive specifika gener eller delar av gener. Det är ett viktigt verktyg för att förstå en mängd olika kromosomavvikelser och andra genetiska mutationer. Till skillnad från de flesta andra tekniker som används för kromosomstudier, behöver FISH inte utföras på celler som aktivt delar sig, vilket gör det till ett mycket mångsidigt förfarande.
Fig. 1 Schema för principen i FISH-experimentet för att lokalisera en gen i kärnan.
Hur fungerar FISH?
FISK är till exempel användbart för att hjälpa en forskare att identifiera var en viss gen faller inom enskilda kromosomer. Så här fungerar det:
o Gör en sond som komplement till den kända sekvensen . När du gör sonden, märk den med en fluorescerande markör, t.ex. fluorescein, genom att införliva nukleotider som har markören fäst vid sig.
o Sätt kromosomerna på ett objektglas och denaturera dem.
o Denaturera proben och lägg till den i mikroskopglaset, så att proben hybridiserar till dess kompletterande plats.
o Tvätta bort överflödig sond och observera kromosomerna under ett fluorescerande mikroskop. Sonden kommer att visas som en eller flera fluorescerande signaler i mikroskopet, beroende på hur många platser den kan hybridisera till.
Fig. 2 De fem grundläggande stegen av FISK. (Oliveira och franska 2005)
Vad används FISH till?
FISK används i stor utsträckning för flera diagnostiska tillämpningar: identifiering av numeriska och strukturella avvikelser, karakterisering av markörkromosomer, övervakning av effekterna av terapi, upptäckt av minimal kvarvarande sjukdom, spårning av cellernas ursprung efter benmärgstransplantation, identifiering av regioner för radering eller amplifiering, detektering av kromosomavvikelser i icke-delande eller terminalt differentierade celler, bestämning av linjär involvering av klonala celler, etc. Dessutom har den många tillämpningar inom forskningen: identifiering av icke-slumpmässiga kromosomomläggningar, identifiering av translokationsmolekylär brytpunkt, identifiering av vanligtvis raderade regioner, genmappning, karakterisering av hybrider av somatiska celler, identifiering av förstärkta gener, studera mekanismen för omläggningar. FISH används också för att jämföra genomerna från två biologiska arter för att härleda evolutionära förhållanden.
Hur många typer av sonder för FISH?
Generellt använder forskare tre olika typer av FISH-sonder, som alla har en annan tillämpning:
Locusspecifika prober binder till en viss region i en kromosom. Denna typ av sond är användbar när forskare har isolerat en liten del av en gen och vill bestämma på vilken kromosom genen är lokaliserad.
Alfoid- eller centromera upprepningssonder genereras från repetitiva sekvenser som finns i mitten av varje kromosom. Forskare använder dessa sonder för att avgöra om en individ har rätt antal kromosomer. Dessa sonder kan också användas i kombination med ”locus-specifika sonder” för att avgöra om en individ saknar genetiskt material från en viss kromosom.
Hela kromosomsonder är faktiskt samlingar av mindre sonder, som var och en binder till en annan sekvens längs längden på en given kromosom. Genom att använda flera sonder märkta med en blandning av olika fluorescerande färgämnen kan forskare märka varje kromosom i sin egen unika färg. Den resulterande fullfärgskartan för kromosomen är känd som en spektral karyotyp. Hela kromosomsonder är särskilt användbara för att undersöka kromosomavvikelser, till exempel när en bit av en kromosom är fäst vid slutet av en annan kromosom.
Våra tjänster och produkter:
Creative Biolabs erbjuder ett komplett utbud av anpassad fluorescens in situ hybridiseringstjänst (FISH) från sonddesign, beredning av kromosom / cell till tolkning av expertresultat.
| A. | Kromosom / cellberedning: Vi kan hjälpa dig att utföra cellkromosom FISK (FISK på interfas, metafas och odlade celler), vävnadskromosom FISK (FISK på formalinfixerad, paraffin- inbäddad vävnad eller cellglas) och RNA-FISH (FISH för att studera intracellulär RNA-lokalisering, RNA-bearbetning, kvantifiering). Vi utförde ett flertal tester som syftade till att förbättra effektiviteten för preparering av cytogenetiska objektglas och öka FISH-signaler. Flera modifieringar av det allmänna protokollet resulterade i bättre kromosomspridning, bättre kromosommorfologi och kortare hybridiseringstider, medan de gav ljusare FISH-signaler. |
| B . | Prober Design, märkning, rening och test: Våra FISH-prober är syntetiska DNA-bitar som kopplas ihop med en fluorescerande indikator så att kromosomerna eller generna som de binder till kan visualiseras direkt under vår bildanalys. systemet. Vårt väletablerade standarddriftsförfarande möjliggör effektiv optimering av märkning av olika fluorescerande sonder. Vi kan också tillhandahålla experimentella tjänster för att möta dina speciella behov. Anpassade sonder är också tillgängliga. Valet av direkt eller indirekt märkta SpectrumOrange-, SpectrumGreen- eller SpectrumAqua-prober är beroende av användning och kombination av andra fluoroforer i FISH-analysen.
o Hela kromosommålningssonder (WPP) |
| C. | In Situ-hybridisering: Vi kan optimera FISH-hybridiseringsförhållandena och tillhandahålla ett komplett utbud av FISH-tjänster. |
| D. | Resultattolkning: Vår FISH-bildanalyssystem består av ett fluorescerande mikroskop, en laddningskopplad enhet (”CCD”) -kamera och programvara för bildanalys. Alla tre komponenterna tillhandahålls av våra komponentleverantörer med interna modifieringar. Genom användning av FISH-sonder möjliggör bildanalyssystemet läkare att upptäcka och lokalisera närvaron eller frånvaron av specifika DNA-sekvenser i kromosomer. |
| E. | Pr enatal diagnos: Våra optimerade detekteringssatser för fosterdiagnostik erbjuder innovativa tekniker och standardmetoder som används för diagnos av fosterstörningar.
o Trisomi (21/18/13/12/9/8) |
| F. | Cancerdiagnos och -prognos: Det finns många testsatser för cancerdiagnos i vårt företag. Du kan också anpassa andra cancerdiagnosprober efter dina behov.
o Blåscancer |
| G. | Reagens för FISH: Våra optimerade reagenser och lösningar hjälper dig att utföra dina FISH-experiment mer smidigt och effektivt. |
| H. | Funktioner: Fördelarna med våra tjänster och produkter är följande:
o Enkelt, enkelt, snabbt och repeterbart |
Citat / referenser
FISH Probe-prover:
Human kromosom 1 målningssond (grön) |
Human kromosom 1 armmålningssond |
Human kromosom 1 terminalbandmålningssond |
Mänsklig kromosom 3 centromersond |
Mänsklig kromosom e 1 subtelomerprober |
Hybridiseringssignal från human XIST-genprob ( röd) |
| TABELL 1: Anpassade FISH-tjänster | ||
| SERVICE | BESKRIVNING | Pris |
| Kromosom- / cellberedning | Vi kan hjälpa dig att utföra cell kromosom FISK (FISK på interfas, metafas och odlade celler) och vävnadskromosom FISK (FISK på formalinfixerad, paraffininbäddad vävnad eller cellglas). | BESTÄLLNING |
| Prober Design, märkning, rening och test | Vår väletablerade standard driftförfarande tillåter s effektiv optimering av märkning av olika fluorescerande sonder. Anpassade sonder är också tillgängliga. Valet av direktmärkta SpectrumOrange-, SpectrumGreen- eller SpectrumAqua-prober är beroende av användning och kombination av andra fluoroforer i FISH-analysen. | BESTÄLLNING |
| In Situ Hybridization | Vi har optimerat FISH-hybridiseringsförhållandena och kan erbjuda alla typer av FISH tjänst för forskare. | BESTÄLLNING |
| Resultattolkning | Vårt FISH-bildanalyssystem består av ett fluorescerande mikroskop, en laddningskopplad kamera (”CCD”) och programvara för bildanalys. Alla tre komponenterna tillhandahålls av våra komponentleverantörer med interna modifieringar. Genom användning av FISH-sonder möjliggör bildanalyssystemet läkare att upptäcka och lokalisera närvaron eller frånvaron av specifika DNA-sekvenser i kromosomer. | BESTÄLLNING |
Alla listade anpassade tjänster & produkter är endast avsedda för forskningsändamål, inte avsedda för farmaceutisk, diagnostisk, terapeutisk eller någon mänsklig användning in vivo.