Blodagar, hemolys och hemolytiska reaktioner
Blodagar är ett fast tillväxtmedium som innehåller röda blodkroppar. Mediet används för att detektera bakterier som producerar enzymer för att bryta isär blodkropparna. Denna process kallas också hemolys. Graden av blodkroppar som hemolyseras används för att skilja bakterier från varandra.
Blodagarmediet framställs i en tvåstegsprocess. Först tillsätts ett antal ingredienser till vatten, inklusive hjärtinfusion, pepton och natriumklorid. Denna lösning steriliseras. Efter sterilisering tillsätts en känd mängd sterilt blod. Blodet kan komma från kanin eller får. Kaninblod är att föredra om målbakterien är från den grupp som kallas grupp A Streptococcus. Fårblod är att föredra om målbakterien är Haemophilus parahaemolyticus.
Blodagar är en rik matkälla för bakterier. Så det kan användas för primärodling, det vill säga som ett medel för att erhålla ett så stort antal bakterietillväxt från ett prov som möjligt. Det används vanligtvis inte för detta ändamål på grund av kostnaden för mediet. Andra, billigare agar kommer att göra samma sak. Vad blodagar är unikt för är bestämningen av hemolys.
Hemolys är nedbrytningen av membranet i röda blodkroppar av ett bakteriellt protein som kallas hemolysin, vilket orsakar frisättning av hemoglobin från det röda blodet. cell. Många typer av bakterier har hemolytiska proteiner. Dessa proteiner antas verka genom att integreras i membranet i de röda blodkropparna och antingen stansa ett hål genom membranet eller störa strukturen på membranet på något annat sätt. De exakta molekylära detaljerna för hemolysinverkan är fortfarande olösta.
Blodet som används i agaren behandlas också i förväg för att avlägsna en molekyl som kallas fibrin, som deltar i blodets koagulation. Frånvaron av fibrin säkerställer att blodet inte koagulerar i agaren, vilket kan störa den visuella detekteringen av de hemolytiska reaktionerna.
Det finns tre typer av hemolys, betecknade alfa, beta och gamma. Alfahemolys är en grönaktig missfärgning som omger en bakteriekoloni som växer på agaren. Denna typ av hemolys representerar en partiell nedbrytning av hemoglobinet i de röda blodkropparna. Alfahemolys är karakteristisk för Streptococcus lunginflammation och kan därför användas som ett diagnostiskt inslag i identifieringen av bakteriestammen.
Betahemolys representerar en fullständig nedbrytning av hemoglobinet i de röda blodkropparna i närheten av bakteriekoloni. Det finns en rensning av agaren runt en koloni. Betahemolys är karakteristisk för Streptococcus pyogenes och vissa stammar av Staphylococcus aureus.
Den tredje typen av hemolys är egentligen ingen hemolys alls. Gammahemolys är brist på hemolys i området kring en bakteriekoloni. En blodagarplatta som visar gammahemolys verkar faktiskt brunaktig. Detta är en normal reaktion av blodet på de tillväxtförhållanden som används (37 ° C i närvaro av koldioxid). Gammahemolys är ett kännetecken för Enterococcus faecalis.
Hemolytiska reaktioner kan också visa en viss synergi. Det vill säga kombinationen av reaktioner ger en reaktion som är starkare än endera av reaktionerna ensamma. Vissa bakteriearter, såsom grupp B Strep (ett exempel är Streptococcus agalactiae) är svagt beta-hemolytiska. Men om bakterierna ligger i närheten av en stam av Staphylococcus kan betahemolysinerna från de två organismerna kombineras för att producera en intensiv beta-hemolytisk reaktion. Detta utgör grunden för ett test som kallas CAMP-testet (efter initialerna för dess uppfinnare).
Bestämningen av hemolys och av de hemolytiska reaktionerna är användbar för att skilja olika typer av bakterier. Efterföljande biokemiska tester kan begränsa identifieringen ytterligare. Till exempel är en beta-hemolytisk reaktion en indikation på en streptokock. Testning av Streptococcus-organismer med bacitracin är ofta nästa steg. Bacitracin är ett antimikrobiellt medel som produceras av bakterien Bacillus subtilis. Streptococcus pyogenes-stammar är nästan enhetligt känsliga för bacitracin. Men andra antigena grupper av Streptococcus är inte bacitracinkänsliga.
Se även Laboratorietekniker inom mikrobiologi; Stafylokocker och stafylokockinfektioner; Streptokocker och streptokockinfektioner