Protocoale online

Ser fiziologic tamponat cu fosfat (abreviat ca PBS) este o soluție tampon utilizată în mod obișnuit în cercetarea biologică. Este o soluție sărată care conține clorură de sodiu, fosfat de sodiu și (în unele formulări) clorură de potasiu și fosfat de potasiu. Tamponul ajută la menținerea unui pH constant. Concentrațiile de osmolaritate și de ioni ale soluției se potrivesc de obicei cu cele ale corpului uman (izotonice).

Aplicații

Cryosectionează-ți țesutul în doar trei ore cu Cryoglass ™ de la Teomics.

PBS are multe utilizări, deoarece este izotonic și netoxic pentru celule. Poate fi folosit pentru a dilua substanțe. Se utilizează pentru clătirea recipientelor care conțin celule. PBS poate fi utilizat ca diluant în metodele de uscare a biomoleculelor, deoarece moleculele de apă din interior vor fi structurate în jurul substanței (proteină, de exemplu) pentru a fi „uscate” și imobilizate pe o suprafață solidă. Pelicula subțire de apă care se leagă de substanță previne denaturarea sau alte modificări conformaționale. Tampoanele de carbonat pot fi utilizate în același scop, dar cu o eficiență mai mică. PBS poate fi utilizat pentru a lua un spectru de referință atunci când se măsoară adsorbția proteinelor în elipsometrie.

Aditivii pot fi folosiți pentru a adăuga funcții. De exemplu, PBS cu EDTA este, de asemenea, utilizat pentru a dezactiva celulele atașate și aglomerate. Cu toate acestea, nu pot fi adăugate metale bivalente, cum ar fi zincul, deoarece acest lucru va duce la precipitații. Pentru aceste tipuri de aplicații, sunt recomandate tampoanele Good’s.

Pregătirea

Există multe modalități diferite de a pregăti PBS. Unele formulări nu conțin potasiu, în timp ce altele conțin calciu sau magneziu. Unul dintre cele mai frecvente preparate este descris mai jos.

Un stoc de 10 litri de 10x PBS poate fi preparat prin dizolvare

• 800 g NaCl,
• 20 g KCl,
• 144 g Na2HPO4 · 2H2O
• 24 g KH2PO4
• 8 L apă distilată.

După amestecarea completă, completați soluția finală la 10 L. pH-ul stocului 10X este de aproximativ 6,8, dar atunci când este diluat la 1x PBS ar trebui să se schimbe la 7,4. Când faceți soluții tampon, este o bună practică să măsurați întotdeauna pH-ul folosind direct un pH-metru. Dacă este necesar, pH-ul poate fi ajustat folosind acid clorhidric sau hidroxid de sodiu.

La diluare, rezultatul 1x PBS ar trebui să aibă o concentrație finală de 137 mM NaCI, 10 mM fosfat, 2,7 mM KCl și un pH de 7.4.
Un alt preparat este descris în Clonarea moleculară de Sambrook, Fritsch și Maniatis, Apendix B.12 după cum urmează:

Pentru 1 litru de 1X PBS, pregătiți după cum urmează:

1. Începeți cu 800 ml apă distilată:
2. Adăugați 8 g NaCl.
3. Adăugați 0,2 g KCl.
4. Adăugați 1,44 g Na2HPO4 .
5. Adăugați 0,24 g de KH2PO4.
6. Reglați pH-ul la 7,4 cu HCI.
7. Adăugați apă distilată la un volum total de 1 litru.

Se distribuie soluția în alicote și se sterilizează prin autoclavare (20 min, 121 ° C, ciclu lichid). A se păstra la temperatura camerei.

1. Dulbecco, R. și colab. (1954): Formarea plăcii și izolarea liniilor pure cu virusurile poliomielitei. În: J. Exp. Med. vol. 99 (2), pp. 167-182. PMID 13130792
2. Sambrook, Fritsch și Maniatis (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, ediția a II-a, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, volumul 3, apendicele B.12
3. Porțiuni din acest articol provin din „Soluție salină tamponată cu fosfat. În Wikipedia, enciclopedia liberă. Accesat la 17 septembrie 2008, din http://en.wikipedia.org/wiki/Phosphate_buffered_saline.” Acest articol a fost revizuit pentru precizie științifică și este utilizat în conformitate cu licența GNU Free Documentation License (GFDL).