Hibridizare in situ fluorescentă (FISH)
Hibridizare in situ fluorescentă (FISH)
Ce este FISH?
Cum funcționează FISH?
Pentru ce se folosește FISH?
Câte tipuri de sonde pentru FISH?
Serviciile și produsele noastre?
Referințe / Referințe?
******************************************* *************************************************** ************************************************** / p>
Ce este FISH?
Hibridizarea in situ a fluorescenței (FISH) este o tehnică citogenetică care folosește sonde fluorescente care leagă părți ale tehromozomului pentru a arăta un grad ridicat de complementaritate a secvenței. Fluorescencemicroscopia poate fi utilizată pentru a afla unde sonda fluorescentă s-a legat de tehromozom. Această tehnică oferă cercetătorilor o modalitate nouă de a vizualiza și de a mapa materialul genetic dintr-o celulă individuală, inclusiv gene specifice sau porțiuni de gene. Este un instrument important pentru înțelegerea unei varietăți de anomalii cromozomiale și alte mutații genetice. Spre deosebire de majoritatea celorlalte tehnici utilizate pentru studiul cromozomilor, FISH nu are nevoie să fie efectuat pe celule care se divid în mod activ, ceea ce îl face o procedură foarte versatilă.
Fig. 1 Schema principiului experimentului FISH pentru localizarea unei gene în nucleu.
Cum funcționează FISH?
FISH este util, de exemplu, pentru a ajuta un cercetător să identifice unde o anumită genă se încadrează în cromozomii individuali. Iată cum funcționează:
o Faceți o sondă complementară secvenței cunoscute . Când faceți sonda, etichetați-o cu un marker fluorescent, de ex. fluoresceină, prin încorporarea nucleotidelor care au markerul atașat la ele.
o Puneți cromozomii pe o lamă de microscop și denaturați-i.
o Denaturați sonda și adăugați-o la lamela microscopului, permițând sondei să se hibridizeze la complementara sa site.
o Spălați excesul de sondă și observați cromozomii la microscop fluorescent. Sonda va apărea ca unul sau mai multe semnale fluorescente în microscop, în funcție de câte site-uri se poate hibridiza.
Fig. 2 Cei cinci pași de bază de PESTE. (Oliveira și franceză 2005)
Pentru ce se folosește FISH?
FISH este utilizat pe scară largă pentru mai multe aplicații de diagnostic: identificarea anomaliilor numerice și structurale, caracterizarea cromozomilor markeri, monitorizarea efectelor terapiei, detectarea bolii minime reziduale, urmărirea originii celulelor după transplantul de măduvă osoasă, identificarea regiunilor de ștergere sau amplificare, detectarea anomaliilor cromozomiale în celulele nedividente sau diferențiate terminal, determinarea implicării descendenței celulelor clonale etc. Mai mult, are multe aplicații în cercetare: identificarea rearanjărilor cromozomiale ne-aleatorii, identificarea punctului de rupere molecular de translocație, identificarea regiunilor șterse în mod obișnuit, cartografierea genelor, caracterizarea hibrizilor celulelor somatice, identificarea genelor amplificate, studierea mecanismului rearanjărilor. FISH este, de asemenea, utilizat pentru a compara genomul a două specii biologice pentru a deduce relații evolutive.
Câte tipuri de sonde pentru FISH?
În general, cercetătorii folosesc trei tipuri diferite de sonde FISH, fiecare dintre acestea având o aplicație diferită:
Sondele specifice Locus se leagă de o anumită regiune a unui cromozom. Acest tip de sondă este util atunci când cercetătorii au izolat o mică porțiune a unei gene și doresc să stabilească pe ce cromozom se află gena.
Sondele repetate alfoide sau centromerice sunt generate din secvențe repetitive găsite în mijlocul fiecărui cromozom. Cercetătorii folosesc aceste sonde pentru a determina dacă un individ are numărul corect de cromozomi. Aceste sonde pot fi, de asemenea, utilizate în combinație cu „sonde specifice locusului” pentru a determina dacă unui individ îi lipsește material genetic dintr-un anumit cromozom.
Sondele întregi pentru cromozomi sunt de fapt colecții de sonde mai mici, fiecare dintre ele legându-se de o secvență diferită lungimea unui cromozom dat. Folosind mai multe sonde etichetate cu un amestec de coloranți fluorescenți diferiți, oamenii de știință sunt capabili să eticheteze fiecare cromozom în propria culoare unică. Harta colorată rezultată a cromozomului este cunoscută sub numele de cariotip spectral. Sondele de cromozomi întregi sunt utile în special pentru examinarea anomaliilor cromozomiale, de exemplu, atunci când o bucată dintr-un cromozom este atașată la capătul altui cromozom.
Serviciile și produsele noastre:
Creative Biolabs oferă o gamă completă de servicii de hibridizare in situ (FISH) cu fluorescență personalizată, de la proiectarea sondei, prepararea cromozomului / celulei până la interpretarea expertă a rezultatelor.
| A. | Pregătirea cromozomului / celulei: Vă putem ajuta să efectuați cromozomul celular FISH (FISH pe interfază, metafază și celule cultivate), cromozomul tisular FISH (FISH pe fixat în formalină, parafină) diapozitive de țesut sau celule încorporate) și ARN-FISH (FISH pentru a studia localizarea intracelulară a ARN-ului, procesarea ARN-ului, cuantificarea). Am efectuat numeroase teste menite să îmbunătățească eficiența pregătirii lamelelor citogenetice și să crească semnalele FISH. Mai multe modificări ale protocolului general au dus la o mai bună răspândire a cromozomilor, o morfologie mai bună a cromozomilor și timpi de hibridizare mai scurți, oferind în același timp semnale FISH mai luminoase. |
| B . | Proiectarea, etichetarea, purificarea și testul sondelor: sondele noastre FISH sunt piese sintetice de ADN care se cuplează cu un indicator fluorescent, astfel încât cromozomii sau genele la care se leagă pot fi vizualizate direct în analiza noastră imagistică sistem. Procedura noastră de operare standard bine stabilită permite optimizarea eficientă a etichetării unei varietăți de sonde fluorescente. De asemenea, putem oferi servicii experimentale pentru a vă satisface nevoile speciale. Sunt disponibile și sonde personalizate. Alegerea sondelor SpectrumOrange, SpectrumGreen sau SpectrumAqua marcate direct sau indirect depinde de utilizarea și combinația altor fluorofori în testul FISH.
o Sonde de vopsire cromozomiale întregi (WPP) |
| C. | Hibridizare in situ: putem optimiza condițiile de hibridizare FISH și oferim o gamă completă de servicii FISH. |
| D. | Interpretarea rezultatelor: Sistemul nostru de analiză imagistică FISH constă dintr-un microscop fluorescent, o cameră cu dispozitiv cuplat de încărcare („CCD”) și un software de analiză imagistică. Toate cele trei componente sunt furnizate de furnizorii noștri de componente cu modificări interne. Prin utilizarea sondelor FISH, sistemul de analiză imagistică permite medicilor să detecteze și să localizeze prezența sau absența secvențelor ADN specifice în cromozomi. |
| E. | Pr Diagnostic enatal: Trusele noastre optimizate de detectare a diagnosticului prenatal oferă tehnologii inovatoare și metode standard care sunt aplicate diagnosticului tulburărilor fetale.
o Trisomie (21/18/13/12/9/8) |
| F. | Diagnosticul și prognostica cancerului: multe companii de testare a diagnosticului cancerului sunt disponibile în compania noastră. De asemenea, puteți personaliza alte sonde de diagnosticare a cancerului în funcție de nevoile dvs.
o Cancer al vezicii urinare |
| G. | Reactivi pentru FISH: reactivii și soluțiile noastre optimizate vă vor ajuta să efectuați experimentele FISH mai ușor și mai eficient. |
| H. | Caracteristici: Avantajele serviciilor și produselor noastre sunt următoarele:
o Simplu, ușor, rapid și repetabil |
Referințe / Referințe
FISH Probe samples:
Sonda de pictură a cromozomului 1 uman (verde) |
Cromozomul uman 1 sonda de pictură a brațului |
Cromozomul uman 1 sonda de vopsire a benzii terminale |
Cromozomul uman 3 sonda centromer |
Cromozom uman e 1 sonde subtelomere |
Semnal de hibridizare a sondei genei XIST umane ( roșu) |
| TABEL 1: Servicii personalizate FISH | ||
| SERVICE | DESCRIERE | Preț |
| Pregătirea cromozomului / celulei | Vă putem ajuta să efectuați celula cromozomul FISH (FISH pe interfază, metafază și celule cultivate) și cromozomul tisular FISH (FISH pe țesuturi fixate în formalină, cu parafină sau diapozitive celulare). | COMANDARE |
| Proiectarea, etichetarea, purificarea și testarea sondelor | procedura de operare standard permite s optimizarea eficientă a etichetării varietății de sonde fluorescente. Sunt disponibile și sonde personalizate. Alegerea sondelor SpectrumOrange, SpectrumGreen sau SpectrumAqua direct etichetate depinde de utilizarea și combinația altor fluorofori în testul FISH. | ORDINARE |
| Hibridizare in situ | Am optimizat condițiile de hibridizare FISH și putem oferi toate tipurile de FISH serviciu pentru cercetători. | ORDINARE |
| Interpretarea rezultatelor | Sistemul nostru de analiză imagistică FISH constă dintr-un microscop fluorescent, o cameră cu dispozitiv cuplat de încărcare („CCD”) și un software de analiză imagistică. Toate cele trei componente sunt furnizate de furnizorii noștri de componente cu modificări interne. Prin utilizarea sondelor FISH, sistemul de analiză imagistică permite medicilor să detecteze și să localizeze prezența sau absența secvențelor ADN specifice în cromozomi. | COMANDARE |
Toate serviciile personalizate listate & produsele sunt destinate exclusiv utilizării în scopuri de cercetare, nu sunt destinate utilizării farmaceutice, diagnostice, terapeutice sau în scopuri umane in vivo.