Protocolos Online

Solução salina tamponada com fosfato (abreviado como PBS) é uma solução tampão comumente usada em pesquisas biológicas. É uma solução salina contendo cloreto de sódio, fosfato de sódio e (em algumas formulações) cloreto de potássio e fosfato de potássio. O tampão ajuda a manter um pH constante. A osmolaridade e as concentrações de íons da solução geralmente correspondem às do corpo humano (isotônico).

Aplicativos

Faça a criossecção de seu tecido em apenas três horas com o Cryoglass ™ da Teomics.

O PBS tem muitos usos porque é isotônico e não tóxico para as células. Ele pode ser usado para diluir substâncias. É usado para enxaguar recipientes contendo células. O PBS pode ser usado como um diluente em métodos para secar biomoléculas, já que as moléculas de água dentro dele serão estruturadas em torno da substância (proteína, por exemplo) a ser “seca” e imobilizada em uma superfície sólida. A fina película de água que se liga à substância evita a desnaturação ou outras alterações conformacionais. Os tampões de carbonato podem ser usados para o mesmo propósito, mas com menos eficácia. O PBS pode ser usado para obter um espectro de referência ao medir a adsorção de proteínas em elipsometria.

Os aditivos podem ser usados para adicionar funções. Por exemplo, PBS com EDTA também é usado para desencaixar células anexadas e aglomeradas. Metais divalentes como o zinco, entretanto, não podem ser adicionados, pois isso resultará em precipitação. Para esses tipos de aplicativos, os buffers de Good são recomendados.

Preparação

Existem muitas maneiras diferentes de preparar o PBS. Algumas formulações não contêm potássio, enquanto outras contêm cálcio ou magnésio. Uma das preparações mais comuns é descrita abaixo.

Um estoque de 10 litros de 10x PBS pode ser preparado dissolvendo

• 800 g NaCl,
• 20 g KCl,
• 144 g Na2HPO4 · 2H2O
• 24 g KH2PO4
• 8 L de água destilada.

Após a mistura completa, complete a solução final para 10 L. O pH do estoque 10X será de aproximadamente 6,8, mas quando diluído para 1x PBS, ele deve mudar para 7,4. Ao fazer soluções tampão, é uma boa prática sempre medir o pH diretamente usando um medidor de pH. Se necessário, o pH pode ser ajustado usando ácido clorídrico ou hidróxido de sódio.

Na diluição, o PBS 1x resultante deve ter uma concentração final de NaCl 137 mM, Fosfato 10 mM, KCl 2,7 mM e um pH de 7.4.
Outra preparação é descrita em Molecular Cloning por Sambrook, Fritsch and Maniatis, Apendix B.12 da seguinte forma:

Para 1 litro de 1X PBS, prepare da seguinte forma:

1. Comece com 800 ml de água destilada:
2. Adicione 8 g de NaCl.
3. Adicione 0,2 g de KCl.
4. Adicione 1,44 g de Na2HPO4 .
5. Adicione 0,24 g de KH2PO4.
6. Ajuste o pH para 7,4 com HCl.
7. Adicione água destilada até um volume total de 1 litro.

Dispense a solução em alíquotas e esterilize em autoclave (20 min, 121 ° C, ciclo de líquido). Armazenar em temperatura ambiente.

1. Dulbecco, R. et al. (1954): Formação de placa e isolamento de linhas puras com vírus da poliomielite. In: J. Exp. Med. vol. 99 (2), pp. 167-182. PMID 13130792
2. Sambrook, Fritsch, and Maniatis (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2ª ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, Nova York, volume 3, apêndice B.12
3. Partes deste artigo são de “Phosphate buffered saline. In Wikipedia, the free encyclopedia. Recuperado em 17 de setembro de 2008, de http://en.wikipedia.org/wiki/Phosphate_buffered_saline.” Este artigo foi revisado quanto à precisão científica e é usado de acordo com a GNU Free Documentation License (GFDL) da Wikipedia.