Não existe mouse C57BL / 6!

É fundamental que você saiba qual substrain C57BL / 6 específica você está usando para que possa usar os controles apropriados para seus experimentos e interpretar seus dados corretamente! Desde C.C. Little (o fundador do Laboratório Jackson) inicialmente gerou a cepa consanguínea C57BL nas décadas de 1920-1930, a sub-raça consanguínea C57BL / 6 se tornou a cepa de camundongo mais frequentemente usada em pesquisas biomédicas. A popularidade dos camundongos consanguíneos C57BL / 6 levou ao estabelecimento de muitas colônias em diferentes fornecedores e instituições acadêmicas em todo o mundo.

Subcains C57BL / 6

Você pode não saber disso: cada vez que uma nova colônia C57BL / 6 é mantida separadamente de uma colônia existente por 20 ou mais gerações, ela se torna uma nova sub-raína C57BL / 6. As gerações são cumulativas, portanto, se cada uma das duas colônias distintas procriar por 10 gerações (~ 2-3 anos), elas estão separadas por 20 gerações e sub-raças diferentes com fenótipos potencialmente diferentes. Como parte da nomenclatura de uma cepa, os códigos de laboratório são adicionados no final como a designação da sub-raça C57BL / 6J é a subestrutura parental; “J” é o código de laboratório para o Laboratório Jackson. Portanto, não há fonte de camundongos “C57BL / 6”; há sempre uma designação mais longa para cada sub-raça, indicando o instituto ou laboratório que mantém as diferentes colônias.

As sub-cepas C57BL / 6 não são as mesmas!

Uma vez que uma nova sub-cepa C57BL / 6 for estabelecida, as mutações espontâneas surgirão tanto na colônia original quanto na nova colônia. Um subconjunto dessas mutações se espalhará pela colônia por deriva genética e se tornará fixo (homozigoto em todos os ratos). Quanto mais tempo as sub-raças individuais são separadas umas das outras, maior o número de diferenças genéticas entre elas. Essas diferenças genéticas podem levar a diferenças fenotípicas.

C57BL / 6J vs. C57BL / 6N

Em 1951, camundongos C57BL / 6J foram enviados ao National Institutes of Health (NIH), onde uma colônia foi estabelecida e foi chamada de C57BL / 6N. Posteriormente, muitas sub-linhagens foram derivadas da colônia C57BL / 6N. Descobriu-se que uma mutação que causa degeneração retiniana irregular, conhecida como Crb1rd8, é homozigótica em todas as sub-linhagens relacionadas com C57BL / 6N, mas não está presente na sub-linhagem C57BL / 6J. Além disso, dados coletados dos centros de fenotipagem do International Knockout Mouse Consortium (IKMC) encontraram inúmeras diferenças fenotípicas entre as sub-cepas C57BL / 6J e C57BL / 6N.

Os perigos de cair na armadilha da ignorância

Pode haver sérias consequências se você não estiver totalmente ciente do histórico genético (cepa e sub-raça) ou de seus ratos experimentais. Você não seria o primeiro pesquisador a cair nesta armadilha. Ao escolher a cepa de controle errada, você corre um grande risco de interpretar mal seus dados, chegar a conclusões errôneas e atrasar seriamente seu programa de pesquisa.

Nossa postagem no blog, “Por que demorou 2 anos para um laboratório de pesquisa de Harvard voltar à pesquisa” descreve como um laboratório de pesquisa acidentalmente associou um fenótipo de imunodeficiência a um alelo de nocaute quando na verdade era devido a uma mutação na subcama C57BL / 6 específica em que o nocaute foi retrocruzado. O erro foi descoberto quando o modelo de nocaute foi retrocruzado em uma subcruzada C57BL / 6 de um fornecedor diferente e o fenótipo foi perdido. Na maioria das vezes, esforço, e os recursos usados para elucidar por que a equipe não conseguiu replicar os resultados anteriores poderiam ter sido salvos se os autores tivessem usado ratos de controle com o mesmo fundo genético – como aquele usado para retrocruzar o modelo de nocaute de interesse.

Este gene é protetor ou tóxico?

Outro exemplo notável vem de um laboratório do National Heart, Lung, and Blood Institute (parte do NIH). Após testar os efeitos de um nocaute de Mapk9 (Jnk2) no paracetamol – lesão hepática induzida usando C57BL / 6J como controles de tipo selvagem , os resultados foram contrários às expectativas. Quando repetido usando C57BL / 6NJ (C57BL / 6N importado para JAX do NIH em 2005) como controles de tipo selvagem, o fenótipo dos nocautes Mapk9 caiu diretamente entre o fenótipo para o C57BL / 6J e C57BL / 6NJ (ver Figura).

Os pesquisadores se viram em uma situação em que podiam interpretar seus dados de duas maneiras opostas, dependendo do controle usado. Se o C57BL / 6J usado como controle, os dados indicaram que o MAPk9 era hepatoprotetor. Se eles usaram C57BL / 6NJ como controles, então MAPK9 parecia ser hepatotóxico.

Figura 1. Conclusões dos dados diferem dependendo da seleção da cepa de controle. Os camundongos foram tratados com acetaminofeno (APAP, 300 mg / kg intraperitonealmente). A lesão hepática foi avaliada 24 horas após o tratamento pela medição da atividade da alanina aminotransferase (ALT) sérica.

Felizmente, os pesquisadores foram capazes de determinar que o nocaute Mapk9 estava em um fundo C57BL / 6N e concluíram que o gene era hepatotóxico.No entanto, pense na facilidade com que esses dados podem ter sido mal interpretados e com que frequência esses erros são perdidos completamente, levando a resultados irreproduzíveis!

Portanto, esteja avisado e certifique-se de conhecer não apenas a linhagem consanguínea, mas também a subcamada de ratos que você está usando para experimentos, de modo que você escolhe os controles certos e produz dados confiáveis e significativos Lembre-se, não existe uma linhagem de camundongo C57BL / 6, sempre há um nome mais longo para ela!