Hibridização fluorescente in situ (FISH)

O que é FISH?

Como funciona o FISH?

Para que é usado o FISH?

Quantos tipos de sondas para FISH?

Nossos serviços e produtos?

Citações / referências?

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O que é FISH?

A hibridização fluorescente in situ (FISH) é um tipo de técnica citogenética que usa sondas fluorescentes que ligam partes do cromossomo para mostrar um alto grau de complementaridade de sequência. A microscopia fluorescente pode ser usada para descobrir onde a sonda fluorescente se ligou ao cromossomo. Essa técnica fornece uma nova maneira para os pesquisadores visualizarem e mapearem o material genético em uma célula individual, incluindo genes específicos ou porções de genes. É uma ferramenta importante para a compreensão de uma variedade de anormalidades cromossômicas e outras mutações genéticas. Diferente da maioria das outras técnicas usadas para estudo de cromossomos, o FISH não precisa ser realizado em células que estão se dividindo ativamente, o que o torna um procedimento muito versátil.

Fig. 1 Esquema do princípio da experiência FISH para localizar um gene no núcleo.

Como funciona o FISH?

FISH é útil, por exemplo, para ajudar um pesquisador a identificar onde um determinado gene se enquadra nos cromossomos de um indivíduo. Veja como funciona:
o Faça uma sonda complementar à sequência conhecida . Ao fazer a sonda, rotule-a com um marcador fluorescente, por exemplo, fluoresceína, ao incorporar nucleotídeos que têm o marcador ligado a eles.
o Coloque os cromossomos em uma lâmina de microscópio e desnature-os.
o Desnature a sonda e adicione-a à lâmina de microscópio, permitindo que a sonda hibridize com sua complementar local.
o Lave o excesso de sonda e observe os cromossomos em um microscópio fluorescente. A sonda será exibida como um ou mais sinais fluorescentes no microscópio, dependendo de quantos locais ela pode hibridizar.

Fig. 2 As cinco etapas básicas de FISH. (Oliveira e French 2005)

Para que é utilizado o FISH?

FISH é amplamente utilizado para várias aplicações de diagnóstico: identificação de anormalidades numéricas e estruturais, caracterização de cromossomos marcadores, monitoramento dos efeitos da terapia, detecção de doença residual mínima, rastreamento da origem das células após o transplante de medula óssea, identificação de regiões de deleção ou amplificação, detecção de anormalidades cromossômicas em células que não se dividem ou diferenciadas terminalmente, determinação de envolvimento de linhagem de células clonais, etc. Além disso, tem muitas aplicações em pesquisa: identificação de rearranjos cromossômicos não aleatórios, identificação de ponto de quebra molecular de translocação, identificação de regiões comumente deletadas, mapeamento de genes, caracterização de híbridos de células somáticas, identificação de genes amplificados, estudo do mecanismo de rearranjos. FISH também é usado para comparar os genomas de duas espécies biológicas para deduzir relações evolutivas.

Quantos tipos de sondas para FISH?

Geralmente, os pesquisadores usam três tipos diferentes de sondas FISH, cada uma delas com uma aplicação diferente:
As sondas específicas do locus se ligam a uma região particular de um cromossomo. Esse tipo de sonda é útil quando os pesquisadores isolaram uma pequena porção de um gene e querem determinar em qual cromossomo o gene está localizado.
Sondas de repetição alfoide ou centromérica são geradas a partir de sequências repetitivas encontradas no meio de cada cromossomo. Os pesquisadores usam essas sondas para determinar se um indivíduo tem o número correto de cromossomos. Essas sondas também podem ser usadas em combinação com “sondas específicas de locus” para determinar se um indivíduo está faltando material genético de um cromossomo específico.
Sondas de cromossomos inteiros são, na verdade, coleções de sondas menores, cada uma das quais se liga a uma sequência diferente ao longo o comprimento de um determinado cromossomo. Usando várias sondas marcadas com uma mistura de diferentes corantes fluorescentes, os cientistas são capazes de rotular cada cromossomo em sua própria cor única. O mapa colorido resultante do cromossomo é conhecido como cariótipo espectral. As sondas cromossômicas inteiras são particularmente úteis para examinar anormalidades cromossômicas, por exemplo, quando um pedaço de um cromossomo é anexado à extremidade de outro cromossomo.

Nossos serviços e produtos:

Creative Biolabs oferece uma gama completa de serviços personalizados de hibridização in situ fluorescente (FISH), desde o projeto da sonda, a preparação de cromossomos / células até a interpretação especializada dos resultados.

Citações / referências

Amostras da sonda FISH:

Todos os serviços personalizados listados & Os produtos são apenas para uso em pesquisa, não se destinam ao uso farmacêutico, diagnóstico, terapêutico ou qualquer uso humano in vivo.