Agar de sangue, hemólise e reações hemolíticas
O ágar de sangue é um meio de crescimento sólido que contém glóbulos vermelhos. O meio é usado para detectar bactérias que produzem enzimas para separar as células do sangue. Este processo também é denominado hemólise. O grau de hemolização das células sanguíneas é usado para distinguir as bactérias umas das outras.
O meio de ágar sangue é preparado em um processo de duas etapas. Primeiro, vários ingredientes são adicionados à água, incluindo infusão de coração, peptona e cloreto de sódio. Esta solução é esterilizada. Após a esterilização, uma quantidade conhecida de sangue estéril é adicionada. O sangue pode ser de coelho ou ovelha. O sangue de coelho é preferido se a bactéria alvo pertencer ao grupo conhecido como Streptococcus do grupo A. O sangue de ovelha é preferível se a bactéria-alvo for Haemophilus parahaemolyticus.
O ágar sangue é uma rica fonte de alimento para bactérias. Assim, pode ser utilizado para cultivo primário, ou seja, como meio de se obter a maior variação possível de crescimento bacteriano de uma amostra. Normalmente, não é usado para este propósito, devido ao custo do meio. Outros ágares menos caros farão a mesma coisa. O ágar sangue é exclusivamente adequado para a determinação da hemólise.
A hemólise é a quebra da membrana dos glóbulos vermelhos por uma proteína bacteriana conhecida como hemolisina, que causa a liberação de hemoglobina do sangue vermelho célula. Muitos tipos de bactérias possuem proteínas hemolíticas. Acredita-se que essas proteínas atuem integrando-se à membrana dos glóbulos vermelhos e abrindo um buraco na membrana ou interrompendo a estrutura da membrana de alguma outra forma. Os detalhes moleculares exatos da ação da hemolisina ainda não foram resolvidos.
O sangue usado no ágar também é tratado previamente para remover uma molécula chamada fibrina, que participa da coagulação do sangue. A ausência de fibrina garante que não ocorra coagulação do sangue no ágar, o que poderia interferir na detecção visual das reações hemolíticas.
Existem três tipos de hemólise, designados alfa, beta e gama. A hemólise alfa é uma descoloração esverdeada que envolve uma colônia bacteriana que cresce no ágar. Este tipo de hemólise representa uma decomposição parcial da hemoglobina dos glóbulos vermelhos. A hemólise alfa é característica da pneumonia por Streptococcus e, portanto, pode ser usada como um recurso de diagnóstico na identificação da cepa bacteriana.
A beta hemólise representa uma quebra completa da hemoglobina dos glóbulos vermelhos nas proximidades de um colônia bacteriana. Há uma limpeza do ágar ao redor de uma colônia. A beta hemólise é característica de Streptococcus pyogenes e algumas cepas de Staphylococcus aureus.
O terceiro tipo de hemólise é na verdade nenhuma hemólise. A hemólise gama é a falta de hemólise na área ao redor de uma colônia bacteriana. Uma placa de ágar sangue exibindo hemólise de gama, na verdade, parece acastanhada. Esta é uma reação normal do sangue às condições de crescimento utilizadas (37 ° C na presença de dióxido de carbono). A hemólise gama é uma característica do Enterococcus faecalis.
As reações hemolíticas também podem apresentar alguma sinergia. Ou seja, a combinação de reações produz uma reação que é mais forte do que qualquer uma das reações sozinha. Certas espécies de bactérias, como Strep do grupo B (n exemplo é Streptococcus agalactiae) são fracamente beta-hemolíticas. No entanto, se a bactéria estiver em estreita proximidade com uma cepa de Staphylococcus, as beta-hemolisinas dos dois organismos podem se combinar para produzir uma intensa reação beta hemolítica. Isso forma a base de um teste chamado teste CAMP (após as iniciais de seus inventores).
A determinação da hemólise e das reações hemolíticas é útil para distinguir diferentes tipos de bactérias. Os testes bioquímicos subsequentes podem restringir a identificação ainda mais. Por exemplo, uma reação beta hemolítica é indicativa de um estreptococo. O teste dos organismos Streptococcus com bacitracina costuma ser o próximo passo. A bacitracina é um antimicrobiano produzido pela bactéria Bacillus subtilis. As cepas de Streptococcus pyogenes são quase uniformemente sensíveis à bacitracina. Mas outros grupos antigênicos de Streptococcus não são sensíveis à bacitracina.
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