Fluorescencyjna hybrydyzacja in situ (FISH)

Co to jest RYBY?

Jak działa FISH?

Do czego służy FISH?

Ile typów sond do FISH?

Nasze usługi i produkty?

Cytaty / referencje?

******************************************* ************************************************ *************************************************

Co to jest RYBY?

Fluorescencyjna hybrydyzacja in situ (FISH) jest rodzajem techniki cytogenetycznej, która wykorzystuje sondy fluorescencyjne wiążące części chromosomu w celu wykazania wysokiego stopnia komplementarności sekwencji. Mikroskopia fluorescencyjna może być wykorzystana do ustalenia, gdzie sonda fluorescencyjna wiąże się z chromosomem. Technika ta zapewnia naukowcom nowy sposób wizualizacji i mapowania materiału genetycznego w pojedynczej komórce, w tym określonych genów lub części genów. Jest to ważne narzędzie do zrozumienia różnorodnych nieprawidłowości chromosomalnych i innych mutacji genetycznych. W odróżnieniu od większości innych technik stosowanych do badania chromosomów, FISH nie musi być wykonywana na komórkach, które aktywnie się dzielą, co czyni ją bardzo wszechstronną procedurą.

Rys. 1 Schemat zasady eksperymentu FISH mającej na celu lokalizację genu w jądrze.

Jak działa FISH?

FISH jest przydatna, na przykład, aby pomóc badaczowi zidentyfikować, gdzie określony gen znajduje się w chromosomach danej osoby. Oto jak to działa:
o Uzupełnij sondę o znaną sekwencję . Wykonując sondę, oznacz ją markerem fluorescencyjnym, np. fluoresceiny, poprzez włączenie nukleotydów, do których przymocowany jest marker.
o Umieść chromosomy na szkiełku mikroskopowym i zdenaturuj je.
o Zdenaturuj sondę i dodaj ją do szkiełka mikroskopowego, umożliwiając sondę hybrydyzację z jej komplementarnym miejscu.
o Zmyć nadmiar sondy i obserwować chromosomy pod mikroskopem fluorescencyjnym. Sonda pokaże w mikroskopie jeden lub więcej sygnałów fluorescencyjnych, w zależności od tego, do ilu miejsc może hybrydyzować.

Ryc. 2 Pięć podstawowych kroków RYB. (Oliveira i French 2005)

Do czego służy FISH?

FISH znajduje szerokie zastosowanie w kilku zastosowaniach diagnostycznych: identyfikacji nieprawidłowości numerycznych i strukturalnych, charakteryzowaniu chromosomów markerowych, monitorowaniu efektów terapii, wykrywaniu minimalnej choroby resztkowej, śledzeniu pochodzenia komórek po przeszczepie szpiku kostnego, identyfikacja regionów delecji lub amplifikacji, wykrywanie nieprawidłowości chromosomowych w niedzielących się lub ostatecznie zróżnicowanych komórkach, określenie zaangażowania linii komórek klonalnych itp. Ponadto ma wiele zastosowań w badaniach: identyfikacja nielosowych rearanżacji chromosomów, identyfikacja molekularnego punktu przerwania translokacji, identyfikacja często delecyjnych regionów, mapowanie genów, charakterystyka hybryd komórek somatycznych, identyfikacja amplifikowanych genów, badanie mechanizmu rearanżacji. FISH jest również używana do porównywania genomów dwóch gatunków biologicznych w celu ustalenia ewolucyjnych zależności.

Ile typów sond do FISH?

Ogólnie badacze używają trzech różnych typów sond FISH, z których każda ma inne zastosowanie:
Sondy specyficzne dla miejsca wiążą się z określonym regionem chromosomu. Ten typ sondy jest przydatny, gdy naukowcy wyizolowali niewielką część genu i chcą określić, na którym chromosomie znajduje się gen.
Sondy z powtórzeniami alfoidalnymi lub centromerowymi są generowane z powtarzalnych sekwencji znajdujących się w środku każdego chromosomu. Naukowcy używają tych sond do określenia, czy dana osoba ma odpowiednią liczbę chromosomów. Sondy te mogą być również używane w połączeniu z „sondami specyficznymi dla miejsca” w celu określenia, czy osobnikowi brakuje materiału genetycznego z określonego chromosomu.
Sondy całych chromosomów to w rzeczywistości zbiory mniejszych sond, z których każda wiąże się z inną sekwencją wzdłuż długość danego chromosomu. Używając wielu sond znakowanych mieszaniną różnych barwników fluorescencyjnych, naukowcy są w stanie oznaczyć każdy chromosom własnym, unikalnym kolorem. Powstała pełnokolorowa mapa chromosomu jest znana jako kariotyp spektralny. Sondy całych chromosomów są szczególnie przydatne do badania nieprawidłowości chromosomowych, na przykład, gdy fragment jednego chromosomu jest dołączony do końca innego chromosomu.

Nasze usługi i produkty:

Creative Biolabs oferuje pełen wachlarz usług niestandardowej hybrydyzacji fluorescencyjnej in situ (FISH) od projektowania sond, przez przygotowanie chromosomów / komórek do interpretacji wyników przez ekspertów.

Cytaty / referencje

Próbki sond FISH:

Wszystkie wymienione spersonalizowane usługi & produkty są przeznaczone wyłącznie do celów badawczych i nie są przeznaczone do użytku farmaceutycznego, diagnostycznego, terapeutycznego ani do jakiegokolwiek użytku in vivo u ludzi.