Protocollen online

Fosfaatgebufferde zoutoplossing (afgekort als PBS) is een bufferoplossing die veel wordt gebruikt bij biologisch onderzoek. Het is een zoute oplossing die natriumchloride, natriumfosfaat en (in sommige formuleringen) kaliumchloride en kaliumfosfaat bevat. De buffer helpt om een constante pH te behouden. De osmolariteit en ionconcentraties van de oplossing komen meestal overeen met die van het menselijk lichaam (isotoon).

Toepassingen

Cryosectie uw weefsel in slechts drie uur met Cryoglass ™ van Teomics.

PBS heeft vele toepassingen omdat het isotoon is en niet giftig voor cellen. Het kan worden gebruikt om stoffen te verdunnen. Het wordt gebruikt om containers met cellen te spoelen. PBS kan worden gebruikt als verdunningsmiddel in methoden om biomoleculen te drogen, omdat watermoleculen erin worden gestructureerd rond de stof (bijvoorbeeld eiwit) om te worden gedroogd en geïmmobiliseerd op een vast oppervlak. De dunne waterfilm die zich aan de stof bindt, voorkomt denaturatie of andere conformatieveranderingen. Carbonaatbuffers kunnen voor hetzelfde doel worden gebruikt, maar met minder effectiviteit. PBS kan worden gebruikt om een referentiespectrum te nemen bij het meten van de eiwitadsorptie in ellipsometrie.

Additieven kunnen worden gebruikt om functies toe te voegen. PBS met EDTA wordt bijvoorbeeld ook gebruikt om aangehechte en samengeklonterde cellen los te maken. Tweewaardige metalen zoals zink kunnen echter niet worden toegevoegd omdat dit tot neerslag zal leiden. Voor dit soort toepassingen worden Good’s buffers aanbevolen.

Voorbereiding

Er zijn veel verschillende manieren om PBS voor te bereiden. Sommige formuleringen bevatten geen kalium, terwijl andere calcium of magnesium bevatten. Een van de meest voorkomende bereidingen wordt hieronder beschreven.

Een voorraad van 10 liter van 10x PBS kan worden bereid door op te lossen

• 800 g NaCl,
• 20 g KCl,
• 144 g Na2HPO4 · 2H2O
• 24 g KH2PO4
• 8 liter gedestilleerd water.

Na het volledig mengen, vul de uiteindelijke oplossing bij tot 10 L. De pH van de 10X bouillon zal ongeveer 6,8 zijn, maar wanneer verdund tot 1x PBS zou dit moeten veranderen in 7,4 Bij het maken van bufferoplossingen is het een goede gewoonte om altijd de pH te meten direct met behulp van een pH-meter. Indien nodig kan de pH worden aangepast met zoutzuur of natriumhydroxide.

Bij verdunning moet de resulterende 1x PBS een eindconcentratie hebben van 137 mM NaCl, 10 mM fosfaat, 2,7 mM KCl en een pH van 7.4.
Een ander preparaat wordt als volgt beschreven in Molecular Cloning door Sambrook, Fritsch en Maniatis, Apendix B.12:

Voor 1 liter 1X PBS, bereid als volgt:

1. Begin met 800 ml gedestilleerd water:
2. Voeg 8 g NaCl toe.
3. Voeg 0,2 g KCl toe.
4. Voeg 1,44 g Na2HPO4 toe .
5. Voeg 0,24 g KH2PO4 toe.
6. Stel de pH in op 7,4 met HCl.
7. Voeg gedestilleerd water toe tot een totaal volume van 1 liter.

Verdeel de oplossing in aliquots en steriliseer door autoclaveren (20 min, 121 ° C, vloeistofcyclus). Bewaren bij kamertemperatuur.

1. Dulbecco, R. et al. (1954): Plaquevorming en isolatie van zuivere lijnen met poliomyelitisvirussen. In: J. Exp. Med. vol. 99 (2), blz. 167-182. PMID 13130792
2. Sambrook, Fritsch en Maniatis (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2e ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, deel 3, bijlage B.12
3. Delen van dit artikel zijn afkomstig uit “Met fosfaat gebufferde zoutoplossing. In Wikipedia, de gratis encyclopedie. Opgehaald op 17 september 2008, van http://en.wikipedia.org/wiki/Phosphate_buffered_saline.” Dit artikel is beoordeeld op wetenschappelijke nauwkeurigheid en wordt gebruikt in overeenstemming met de GNU Free Documentation License (GFDL) van Wikipedia.