Fluorescerende in situ hybridisatie (FISH)
Fluorescerende in situ hybridisatie (FISH)
Wat is FISH?
Hoe werkt FISH?
Waar wordt FISH voor gebruikt?
Hoeveel soorten sondes voor FISH?
Onze diensten en producten?
Citaten / referenties?
********************************************* **************************************************** ***************************************************
Wat is FISH?
Fluorescentie in situ hybridisatie (FISH) is een soort cytogenetische techniek die fluorescerende sondes gebruikt die delen van het chromosoom binden om een hoge mate van sequentie-complementariteit aan te tonen. Fluorescentiemicroscopie kan worden gebruikt om uit te zoeken waar de fluorescerende sonde zich aan het chromosoom bond. Deze techniek biedt onderzoekers een nieuwe manier om het genetische materiaal in een individuele cel te visualiseren en in kaart te brengen, inclusief specifieke genen of delen van genen. Het is een belangrijk hulpmiddel om een verscheidenheid aan chromosomale afwijkingen en andere genetische mutaties te begrijpen. Anders dan de meeste andere technieken die worden gebruikt voor chromosomenonderzoek, hoeft FISH niet te worden uitgevoerd op cellen die actief delen, wat het een zeer veelzijdige procedure maakt.
Fig. 1 Schema van het principe van het FISH-experiment om een gen in de kern te lokaliseren.
Hoe werkt FISH?
FISH is bijvoorbeeld nuttig om een onderzoeker te helpen identificeren waar een bepaald gen binnen de chromosomen van een individu valt. Zo werkt het:
o Maak een probe die complementair is aan de bekende sequentie . Bij het maken van de sonde, markeer deze met een fluorescerende marker, bijv. fluoresceïne, door nucleotiden op te nemen waaraan de marker is bevestigd.
o Plaats de chromosomen op een microscoopglaasje en denatureer ze.
o Denatureer de sonde en voeg deze toe aan het objectglaasje, zodat de sonde hybridiseert met zijn complementaire site.
o Was de overtollige sonde af en bekijk de chromosomen onder een fluorescentiemicroscoop. De sonde wordt weergegeven als een of meer fluorescerende signalen in de microscoop, afhankelijk van het aantal locaties waarmee hij kan hybridiseren.
Fig. 2 De vijf basisstappen van FISH. (Oliveira en Frans 2005)
Waar wordt FISH voor gebruikt?
FISH wordt veel gebruikt voor verschillende diagnostische toepassingen: identificatie van numerieke en structurele afwijkingen, karakterisering van markerchromosomen, monitoring van de effecten van therapie, detectie van minimale restziekte, volgen van de oorsprong van cellen na beenmergtransplantatie, identificatie van regios van deletie of amplificatie, detectie van chromosoomafwijkingen in niet-delende of terminaal gedifferentieerde cellen, bepaling van afstammingsbetrokkenheid van klonale cellen, enz. Bovendien heeft het vele toepassingen in onderzoek: identificatie van niet-willekeurige chromosoomherschikkingen, identificatie van moleculair translocatiebreekpunt, identificatie van vaak verwijderde regios, gen mapping, karakterisering van somatische celhybriden, identificatie van geamplificeerde genen, studie van het mechanisme van herschikkingen. FISH wordt ook gebruikt om de genomen van twee biologische soorten te vergelijken om evolutionaire relaties af te leiden.
Hoeveel soorten sondes voor FISH?
Over het algemeen gebruiken onderzoekers drie verschillende soorten FISH-sondes, die elk een andere toepassing hebben:
Locus-specifieke sondes binden aan een bepaald gebied van een chromosoom. Dit type sonde is handig wanneer onderzoekers een klein deel van een gen hebben geïsoleerd en willen bepalen op welk chromosoom het gen zich bevindt.
Alfoïde of centromere herhalingssondes worden gegenereerd op basis van repetitieve sequenties die in het midden van elk chromosoom worden gevonden. Onderzoekers gebruiken deze sondes om te bepalen of een individu het juiste aantal chromosomen heeft. Deze sondes kunnen ook worden gebruikt in combinatie met locus-specifieke sondes om te bepalen of een individu genetisch materiaal van een bepaald chromosoom mist.
Hele chromosoomsondes zijn eigenlijk verzamelingen van kleinere sondes, die elk aan een andere sequentie binden de lengte van een bepaald chromosoom. Met behulp van meerdere sondes die zijn gelabeld met een mengsel van verschillende fluorescerende kleurstoffen, kunnen wetenschappers elk chromosoom in zijn eigen unieke kleur labelen. De resulterende kleurenkaart van het chromosoom staat bekend als een spectraal karyotype. Hele chromosoomsondes zijn met name handig voor het onderzoeken van chromosomale afwijkingen, bijvoorbeeld wanneer een stuk van het ene chromosoom aan het uiteinde van een ander chromosoom is bevestigd.
Onze diensten en producten:
Creative Biolabs biedt een volledige reeks aangepaste fluorescentie in situ hybridisatie (FISH) -service van probe-ontwerp, chromosoom / cel-voorbereiding tot deskundige resultaatinterpretatie.
| A. | Chromosoom- / celvoorbereiding: we kunnen u helpen bij het uitvoeren van celchromosoom FISH (FISH op interfase, metafase en gekweekte cellen), weefselchromosoom FISH (FISH op formaline-gefixeerd, paraffine ingebedde weefsel- of celdias) en RNA-FISH (FISH om intracellulaire RNA-lokalisatie, RNA-verwerking, kwantificering te bestuderen). We hebben talloze tests uitgevoerd om de efficiëntie van de cytogenetische preparatie van objectglaasjes te verbeteren en om FISH-signalen te verhogen. Verschillende aanpassingen van het algemene protocol resulteerden in een betere chromosoomspreiding, betere chromosoommorfologie en kortere hybridisatietijden, terwijl ze helderdere FISH-signalen opleverden. |
| B . | Ontwerpen, labelen, zuiveren en testen van sondes: onze FISH-sondes zijn synthetische stukjes DNA die aan een fluorescerende indicator zijn gekoppeld, zodat de chromosomen of genen waaraan ze binden direct kunnen worden gevisualiseerd onder onze beeldvormingsanalyse systeem. Onze beproefde standaard werkprocedure maakt een efficiënte optimalisatie mogelijk van het labelen van een verscheidenheid aan fluorescerende sondes. We kunnen ook experimentele services bieden om aan uw speciale behoeften te voldoen. Op maat gemaakte sondes zijn ook beschikbaar. De keuze van direct of indirect gelabelde SpectrumOrange-, SpectrumGreen- of SpectrumAqua-probes is afhankelijk van het gebruik en de combinatie van andere fluoroforen in de FISH-assay.
o Hele chromosoomschilderingssondes (WPP) |
| C. | In situ hybridisatie: we kunnen de FISH-hybridisatiecondities optimaliseren en een volledige reeks FISH-services bieden. |
| D. | Interpretatie van het resultaat: Ons FISH-beeldvormingsanalysesysteem bestaat uit een fluorescentiemicroscoop, een camera met ladingsgekoppeld apparaat (“CCD”) en beeldanalysesoftware. Door het gebruik van FISH-sondes stelt het beeldanalysesysteem artsen in staat de aan- of afwezigheid van specifieke DNA-sequenties in chromosomen te detecteren en te lokaliseren. |
| E. | Pr enatale diagnose: onze geoptimaliseerde detectiekits voor prenatale diagnose bieden innovatieve technologieën en standaardmethoden die worden toegepast voor de diagnose van foetale aandoeningen.
o Trisomie (21/18/13/12/9/8) |
| F. | Kankerdiagnose en -prognose: er zijn veel testkits voor kankerdiagnose verkrijgbaar in ons bedrijf. U kunt ook andere sondes voor de diagnose van kanker aanpassen aan uw behoeften.
o Blaaskanker |
| G. | Reagentia voor FISH: onze geoptimaliseerde reagentia en oplossingen zullen u helpen uw FISH-experimenten soepeler en efficiënter uit te voeren. |
| H. | Kenmerken: De voordelen van onze diensten en producten zijn als volgt:
o Eenvoudig, gemakkelijk, snel en herhaalbaar |
Citaten / referenties
FISH-sondevoorbeelden:
Schilderen sonde menselijk chromosoom 1 (groen) |
Humaan chromosoom 1 arm schilderij sonde |
Human chromosoom 1 terminal band painting probe |
Menselijk chromosoom 3 centromeer-probe |
Menselijk chromosoom e 1 subtelomere probes |
Hybridisatiesignaal van menselijke XIST-gen-probe ( red) |
| TABEL 1: aangepaste FISH-services | ||
| SERVICE | BESCHRIJVING | Prijs |
| Chromosoom- / celvoorbereiding | We kunnen u helpen chromosoom FISH (FISH op interfase, metafase en gekweekte cellen) en weefselchromosoom FISH (FISH op in formaline gefixeerde, in paraffine ingebedde weefsel- of celdias). | BESTELLEN |
| Ontwerpen, labelen, zuiveren en testen van sondes | Onze beproefde standaard bedieningsprocedure toestaan s efficiënte optimalisatie van het labelen van verschillende fluorescerende sondes. Op maat gemaakte sondes zijn ook beschikbaar. De keuze van direct gelabelde SpectrumOrange-, SpectrumGreen- of SpectrumAqua-probes is afhankelijk van het gebruik en de combinatie van andere fluoroforen in de FISH-assay. | BESTELLEN |
| In situ hybridisatie | We hebben de FISH-hybridisatiecondities geoptimaliseerd en kunnen allerlei soorten FISH leveren service voor onderzoekers. | BESTELLEN |
| Interpretatie van resultaten | Ons FISH-beeldanalysesysteem bestaat uit een fluorescentiemicroscoop, een charge-coupled-device (“CCD”) camera en beeldanalysesoftware. Alle drie de componenten worden geleverd door onze componentenleveranciers met interne modificaties. Door het gebruik van FISH-sondes stelt het beeldanalysesysteem artsen in staat de aan- of afwezigheid van specifieke DNA-sequenties in chromosomen te detecteren en te lokaliseren. | BESTELLEN |
Alle vermelde aangepaste services & producten zijn alleen voor onderzoeksdoeleinden, niet bedoeld voor farmaceutisch, diagnostisch, therapeutisch of enig in vivo menselijk gebruik.