C57BL / 6 마우스와 같은 것은 없습니다!
실험에 적합한 컨트롤을 사용하고 데이터를 올바르게 해석하려면 사용중인 특정 C57BL / 6 서브 스트레인을 아는 것이 중요합니다! C.C. 이후 Little (The Jackson Laboratory)의 창립자 인 Little은 1920 년대 -1930 년대에 C57BL 근친 균주를 처음 생성했으며 근친 아종 C57BL / 6은 생의학 연구에서 가장 자주 사용되는 마우스 균주가되었습니다. C57BL / 6 근친 교배 마우스의 인기로 인해 전 세계의 다양한 공급 업체 및 학술 기관에 많은 식민지가 설립되었습니다.
C57BL / 6 하위 계통
모를 수도 있습니다. 새로운 C57BL / 6 콜로니가 기존 콜로니와 별도로 20 세대 이상 유지되면 새로운 C57BL / 6 서브 스트레인이됩니다. 세대는 누적되므로 두 개의 분리 된 콜로니가 각각 10 세대 (~ 2 ~ 3 년) 동안 번식하면 20 세대 떨어져 있고 잠재적으로 다른 표현형을 가진 다른 하위 균주입니다. 균주 명명법의 일부로 실험실 코드가 하위 균주 지정으로 끝에 추가됩니다. C57BL / 6J는 부모 하위 계통입니다. “J”는 The Jackson Laboratory의 실험실 코드이므로 “C57BL / 6″마우스의 소스가 없습니다. 서로 다른 콜로니를 유지하는 기관 또는 실험실을 나타내는 각 서브 스트레인에 대해 항상 더 긴 지정이 있습니다.
C57BL / 6 서브 스트레인은 동일하지 않습니다!
새로운 C57BL / 6 서브 스트레인 원래 식민지와 새 식민지 모두에서 자발적인 돌연변이가 발생합니다. 이러한 돌연변이의 하위 집합은 유전 적 드리프트에 의해 식민지를 통해 확산되고 고정됩니다 (모든 마우스에서 동형 접합성). 개별 서브 스트레인이 더 오래 분리 될수록 그들 사이의 유전 적 차이가 더 많아집니다. 이러한 유전 적 차이는 표현형 차이로 이어질 수 있습니다.
C57BL / 6J vs. C57BL / 6N
1951 년에 C57BL / 6J 마우스는 국립 보건원 (NIH)으로 보내졌습니다. 식민지가 설립되었고 C57BL / 6N이라고 불 렸습니다. 그 결과, C57BL / 6N 콜로니에서 많은 하위 균주가 파생되었습니다. Crb1rd8로 알려진 반점 망막 변성을 유발하는 돌연변이는 모든 C57BL / 6N 관련 서브 스트레인에서 동형 접합 성인 것으로 밝혀졌지만 C57BL / 6J 서브 스트레인에는 존재하지 않습니다. 또한 IKMC (International Knockout Mouse Consortium) 표현형 센터에서 수집 한 데이터는 C57BL / 6J와 C57BL / 6N 하위 균주간에 수많은 표현형 차이를 발견했습니다.
무지 함정에 빠질 위험
유전 적 배경 (스트레인 및 서브 스트레인) 또는 실험용 마우스를 완전히 인식하지 못하면 심각한 결과가 발생할 수 있습니다. 이 함정에 빠진 최초의 연구원은 당신이 아닙니다. 잘못된 제어 변형을 선택하면 데이터를 잘못 해석하고 잘못된 결론에 도달하고 연구 프로그램을 심각하게 지연시킬 위험이 높습니다.
저희 블로그 게시물 인 “하버드 연구소가 연구로 돌아가는 데 2 년이 걸렸던 이유”는 연구실이 실제로 만기가되었을 때 우연히 면역 결핍 표현형을 녹아웃 대립 유전자와 연관시키는 방법을 설명합니다. 특정 C57BL / 6 서브 스트레인의 돌연변이에 녹아웃이 역 교배되었습니다. 녹아웃 모델이 다른 공급 업체의 C57BL / 6 서브 스트레인에 역 교배되었을 때 오류가 발견되어 표현형이 손실되었습니다. 대부분의 시간, 노력, 연구팀이 이전 결과를 복제 할 수 없었던 이유를 설명하는 데 사용 된 리소스는 저자가 관심있는 녹아웃 모델을 백 크로스하는 데 사용 된 것과 동일한 유전 적 배경을 가진 대조군 마우스를 사용했다면 절약 될 수있었습니다.
이 유전자가 보호 성입니까, 독성입니까?
또 다른 주목할만한 예는 국립 심장, 폐 및 혈액 연구소 (NIH의 일부)에있는 실험실에서 나옵니다. Mapk9 (Jnk2) 녹아웃이 아세트 아미노펜에 미치는 영향을 테스트 한 후 야생형 대조군으로 C57BL / 6J를 사용한 간 손상 유발 , 결과는 예상과 상반되었습니다. 야생형 대조군으로 C57BL / 6NJ (2005 년 NIH에서 JAX로 가져온 C57BL / 6N)를 반복하여 사용했을 때 Mapk9 녹아웃의 표현형은 C57BL / 6J와 C57BL / 6NJ의 표현형 사이에 정확히 떨어졌습니다 (그림 참조).
연구자들은 사용 된 컨트롤에 따라 두 가지 반대 방식으로 데이터를 해석 할 수있는 상황에 처했습니다. 대조군으로 C57BL / 6J를 사용한 경우 데이터는 MAPk9가 간 보호임을 나타냅니다. C57BL / 6NJ를 대조군으로 사용했다면 MAPK9는 간독성으로 보였습니다.
그림 1. 데이터 결론 제어 스트레인 선택에 따라 다릅니다. 마우스는 아세트 아미노펜 (APAP, 300 mg / kg 복강 내)으로 처리되었습니다. 간 손상은 치료 24 시간 후 혈청 알라닌 아미노 트랜스퍼 라제 (ALT) 활성을 측정하여 평가했습니다.
다행히도 연구원들은 Mapk9 녹아웃이 C57BL / 6N 배경에 있다는 것을 확인할 수 있었고 유전자는 간독성이었습니다.그러나이 데이터가 얼마나 쉽게 잘못 해석되고 그러한 실수가 완전히 누락되어 재현 불가능한 결과로 이어질 수 있는지 생각해보십시오!
그러므로 사전에 경고하고 근친 계통뿐 아니라 또한 알고 있어야합니다. 실험에 사용하는 마우스의 하위 계통을 파악하여 올바른 컨트롤을 선택하고 신뢰할 수있는 의미있는 데이터를 생성 할 수 있습니다. C57BL / 6 마우스 변형과 같은 것은 없으며 항상 더 긴 이름이 있습니다!