オンラインプロトコル
内容
- 準備
リン酸緩衝生理食塩水（略してPBS）は、生物学研究で一般的に使用される緩衝液です。これは、塩化ナトリウム、リン酸ナトリウム、および（一部の製剤では）塩化カリウムとリン酸カリウムを含む塩辛い溶液です。緩衝液は一定のpHを維持するのに役立ちます。溶液の浸透圧とイオン濃度は通常、人体の浸透圧とイオン濃度に一致します（等張）。
アプリケーション
TeomicsのCryoglass™を使用してわずか3時間で組織を凍結切片化します。PBSは等張で細胞に無毒であるため、多くの用途があります。物質の希釈に使用できます。細胞の入った容器をすすぐために使用されます。 PBSは、生体分子を乾燥させる方法の希釈剤として使用できます。これは、PBS内の水分子が物質（タンパク質など）の周囲に構造化され、「乾燥」して固体表面に固定化されるためです。物質に結合する水の薄膜は、変性やその他のコンフォメーション変化を防ぎます。炭酸塩緩衝液は同じ目的で使用できますが、効果は低くなります。 PBSは、エリプソメトリーでタンパク質吸着を測定するときに参照スペクトルを取得するために使用できます。
添加剤を使用して機能を追加できます。たとえば、EDTAを含むPBSは、付着した細胞や凝集した細胞を切り離すためにも使用されます。ただし、亜鉛などの二価金属は沈殿を引き起こすため、添加できません。これらのタイプのアプリケーションには、グッドのバッファーをお勧めします。
準備
PBSを準備するにはさまざまな方法があります。一部の製剤にはカリウムが含まれていませんが、他の製剤にはカルシウムまたはマグネシウムが含まれています。最も一般的な調製物の1つを以下に説明します。
10リットルの10xPBSを溶解することにより、10リットルのストックを調製できます
- 800gのNaCl
- 20 g KCl、
- 144 g Na2HPO4・2H2O
- 24 g KH2PO4
- 8Lの蒸留水。
完全に混合した後、最終溶液を10 Lに補充します。10XストックのpHは約6.8になりますが、1x PBSに希釈すると、7.4に変化するはずです。緩衝液を作成するときは、常にpHを測定することをお勧めします。 pHメーターを直接使用します。必要に応じて、塩酸または水酸化ナトリウムを使用してpHを調整できます。
希釈すると、得られる1x PBSの最終濃度は137mM NaCl、10 mMリン酸、2.7 mM KCl、pHは7.4。
別の調製物は、Sambrook、Fritsch and Maniatisによる分子クローニング、付録B.12に次のように記載されています。
1リットルの1XPBSの場合、次のように調製します。
- 800 mlの蒸留水から始めます：
- 8gのNaClを追加します。
- 0.2gのKClを追加します。
- 1.44gのNa2HPO4を追加します。 。
- 0.24gのKH2PO4を追加します。
- HClでpHを7.4に調整します。
- 総量が1リットルになるように蒸留水を追加します。
溶液をアリコートに分注し、オートクレーブ（20分、121°C、液体サイクル）で滅菌します。室温で保管してください。
- Dulbecco、R。etal。 （1954）：ポリオウイルスによる純粋な系統のプラーク形成と分離。で：J。Exp。 Med。巻99（2）、pp.167-182。 PMID 13130792
- Sambrook、Fritsch、and Maniatis（1989）Molecular Cloning：A Laboratory Manual、2nd ed。、Cold Spring Harbour Laboratory Press、Cold Spring Harbour、New York、volume 3、appendix B.12
- この記事の一部は、「リン酸緩衝生理食塩水。ウィキペディアでは、無料の百科事典です。2008年9月17日、http://en.wikipedia.org/wiki/Phosphate_buffered_salineから取得しました。」この記事は科学的な正確性についてレビューされており、ウィキペディアのGNU Free Documentation License（GFDL）に従って使用されています。