Protocolli in linea

Soluzione salina tamponata con fosfato (abbreviato come PBS) è una soluzione tampone comunemente utilizzata nella ricerca biologica. È una soluzione salata contenente cloruro di sodio, fosfato di sodio e (in alcune formulazioni) cloruro di potassio e fosfato di potassio. Il tampone aiuta a mantenere un pH costante. Losmolarità e le concentrazioni di ioni della soluzione di solito corrispondono a quelle del corpo umano (isotonico).

Applicazioni

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PBS ha molti usi perché è isotonico e non tossico per le cellule. Può essere utilizzato per diluire sostanze. Viene utilizzato per risciacquare contenitori contenenti cellule. Il PBS può essere utilizzato come diluente nei metodi per essiccare le biomolecole, poiché le molecole dacqua al suo interno saranno strutturate attorno alla sostanza (proteine, ad esempio) da “essiccare” e immobilizzare su una superficie solida. La sottile pellicola dacqua che si lega alla sostanza impedisce la denaturazione o altri cambiamenti conformazionali. I tamponi carbonatici possono essere utilizzati per lo stesso scopo ma con minore efficacia. PBS può essere utilizzato per prendere uno spettro di riferimento quando si misura ladsorbimento delle proteine in ellissometria.

Gli additivi possono essere utilizzati per aggiungere la funzione. Ad esempio, PBS con EDTA viene utilizzato anche per disimpegnare le cellule attaccate e raggruppate. Tuttavia, non è possibile aggiungere metalli bivalenti come lo zinco poiché ciò provocherà precipitazione. Per questi tipi di applicazioni, si consigliano i buffer di Good.

Preparazione

Esistono molti modi diversi per preparare PBS. Alcune formulazioni non contengono potassio, mentre altre contengono calcio o magnesio. Una delle preparazioni più comuni è descritta di seguito.

Una scorta da 10 litri di 10x PBS può essere preparata sciogliendo

• 800 g di NaCl,
• 20 g KCl,
• 144 g Na2HPO4 · 2H2O
• 24 g KH2PO4
• 8 L di acqua distillata.

Dopo la miscelazione completa, rabboccare la soluzione finale a 10 L. Il pH dello stock 10X sarà di circa 6,8, ma quando diluito a 1x PBS dovrebbe passare a 7,4.Quando si preparano soluzioni tampone, è buona pratica misurare sempre il pH direttamente utilizzando un pHmetro. Se necessario, il pH può essere regolato utilizzando acido cloridrico o idrossido di sodio.

Alla diluizione, il PBS 1x risultante dovrebbe avere una concentrazione finale di 137 mM NaCl, 10 mM Fosfato, 2,7 mM KCl e un pH di 7.4.
Unaltra preparazione è descritta in Molecular Cloning di Sambrook, Fritsch and Maniatis, Apendix B.12 come segue:

Per 1 litro di PBS 1X, preparare come segue:

1. Inizia con 800 ml di acqua distillata:
2. Aggiungi 8 g di NaCl.
3. Aggiungi 0,2 g di KCl.
4. Aggiungi 1,44 g di Na2HPO4 .
5. Aggiungere 0,24 g di KH2PO4.
6. Regolare il pH a 7,4 con HCl.
7. Aggiungere acqua distillata fino a un volume totale di 1 litro.

Dispensare la soluzione in aliquote e sterilizzare in autoclave (20 min, 121 ° C, ciclo liquido). Conservare a temperatura ambiente.

1. Dulbecco, R. et al. (1954): Formazione di placche e isolamento di linee pure con virus della poliomielite. In: J. Exp. Med. vol. 99 (2), pagg. 167-182. PMID 13130792
2. Sambrook, Fritsch e Maniatis (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2a ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, volume 3, apendice B.12
3. Parti di questo articolo sono tratte da “Phosphate buffered saline. In Wikipedia, the free enciclopedia. Estratto il 17 settembre 2008 da http://en.wikipedia.org/wiki/Phosphate_buffered_saline.” Questo articolo è stato esaminato per verificarne laccuratezza scientifica ed è utilizzato in conformità con la GNU Free Documentation License (GFDL) di Wikipedia.