Ibridazione fluorescente in situ (FISH)
Ibridazione fluorescente in situ (FISH)
Che cosè FISH?
Come funziona FISH?
Per cosa viene utilizzato FISH?
Quanti tipi di sonde per FISH?
I nostri servizi e prodotti?
Citazioni / riferimenti?
******************************************* ************************************************** *************************************************
Cosè FISH?
Libridazione in situ a fluorescenza (FISH) è una sorta di tecnica citogenetica che utilizza sonde fluorescenti che legano parti del trecromosoma per mostrare un alto grado di complementarità di sequenza. La microscopia a fluorescenza può essere utilizzata per scoprire dove la sonda fluorescente si è legata al tromosoma. Questa tecnica fornisce ai ricercatori un nuovo modo per visualizzare e mappare il materiale genetico in una singola cellula, inclusi geni specifici o porzioni di geni. È uno strumento importante per comprendere una varietà di anomalie cromosomiche e altre mutazioni genetiche. Diversamente dalla maggior parte delle altre tecniche utilizzate per lo studio dei cromosomi, la FISH non ha bisogno di essere eseguita su cellule che si stanno attivamente dividendo, il che la rende una procedura molto versatile.
Fig. 1 Schema del principio dellesperimento FISH per localizzare un gene nel nucleo.
Come funziona FISH?
FISH è utile, ad esempio, per aiutare un ricercatore a identificare dove un particolare gene rientra nei cromosomi di un individuo. Ecco come funziona:
o Crea una sonda complementare alla sequenza nota . Quando si effettua la sonda, etichettarla con un pennarello fluorescente, ad es. fluoresceina, incorporando nucleotidi a cui è attaccato il marker.
o Mettere i cromosomi su un vetrino da microscopio e denaturarli.
o Denaturare la sonda e aggiungerla al vetrino da microscopio, consentendo alla sonda di ibridarsi con il suo complementare sito.
o Lavare la sonda in eccesso e osservare i cromosomi al microscopio a fluorescenza. La sonda mostrerà come uno o più segnali fluorescenti nel microscopio, a seconda di quanti siti può ibridarsi.
Fig. 2 I cinque passaggi fondamentali di PESCE. (Oliveira e French 2005)
A cosa serve FISH?
La FISH è ampiamente utilizzata per diverse applicazioni diagnostiche: identificazione di anomalie numeriche e strutturali, caratterizzazione di cromosomi marker, monitoraggio degli effetti della terapia, rilevamento di una malattia residua minima, monitoraggio dellorigine delle cellule dopo il trapianto di midollo osseo, identificazione di regioni di delezione o amplificazione, rilevamento di anomalie cromosomiche in cellule non in divisione o differenziate in modo terminale, determinazione del coinvolgimento del lignaggio di cellule clonali, ecc. Inoltre ha molte applicazioni nella ricerca: identificazione di riarrangiamenti cromosomici non casuali, identificazione di breakpoint molecolari di traslocazione, identificazione di regioni comunemente cancellate, mappatura genica, caratterizzazione di ibridi di cellule somatiche, identificazione di geni amplificati, studio del meccanismo di riarrangiamenti. FISH viene utilizzato anche per confrontare i genomi di due specie biologiche per dedurre relazioni evolutive.
Quanti tipi di sonde per FISH?
In genere, i ricercatori utilizzano tre diversi tipi di sonde FISH, ognuna delle quali ha unapplicazione diversa:
Le sonde specifiche del locus si legano a una particolare regione di un cromosoma. Questo tipo di sonda è utile quando i ricercatori hanno isolato una piccola porzione di un gene e vogliono determinare su quale cromosoma si trova il gene.
Le sonde ripetitive alfoidi o centromeriche sono generate da sequenze ripetitive trovate nel mezzo di ciascun cromosoma. I ricercatori utilizzano queste sonde per determinare se un individuo ha il numero corretto di cromosomi. Queste sonde possono anche essere utilizzate in combinazione con “sonde specifiche del locus” per determinare se un individuo manca di materiale genetico da un particolare cromosoma.
Le sonde cromosomiche complete sono in realtà raccolte di sonde più piccole, ciascuna delle quali si lega a una sequenza diversa lungo la lunghezza di un dato cromosoma. Utilizzando più sonde etichettate con una miscela di diversi coloranti fluorescenti, gli scienziati sono in grado di etichettare ogni cromosoma con il proprio colore unico. La mappa a colori risultante del cromosoma è nota come cariotipo spettrale. Le sonde cromosomiche complete sono particolarmente utili per esaminare anomalie cromosomiche, ad esempio, quando un pezzo di un cromosoma è attaccato allestremità di un altro cromosoma.
I nostri servizi e prodotti:
Creative Biolabs offre una gamma completa di servizi personalizzati di ibridazione in situ fluorescente (FISH) dalla progettazione della sonda, alla preparazione di cromosomi / cellule allinterpretazione dei risultati da parte di esperti.
| A. | Preparazione di cromosomi / cellule: possiamo aiutarti a eseguire il cromosoma cellulare FISH (FISH in interfase, metafase e cellule in coltura), cromosoma tissutale FISH (FISH su formalina fissata, paraffina- tessuto incorporato o vetrini cellulari) e RNA-FISH (FISH per studiare la localizzazione intracellulare dellRNA, lelaborazione dellRNA, la quantificazione). Abbiamo eseguito numerosi test volti a migliorare lefficienza della preparazione dei vetrini citogenetici e ad aumentare i segnali FISH. Diverse modifiche del protocollo generale hanno prodotto una migliore diffusione dei cromosomi, una migliore morfologia dei cromosomi e tempi di ibridazione più brevi, producendo segnali FISH più luminosi. |
| B . | Progettazione, etichettatura, purificazione e test delle sonde: le nostre sonde FISH sono pezzi sintetici di DNA che si accoppiano con un indicatore fluorescente, in modo che i cromosomi oi geni a cui si legano possano essere visualizzati direttamente sotto la nostra analisi di imaging sistema. La nostra procedura operativa standard consolidata consente unottimizzazione efficiente delletichettatura di una varietà di sonde fluorescenti. Inoltre, possiamo fornire servizi sperimentali per soddisfare le vostre esigenze speciali. Sono disponibili anche sonde personalizzate. La scelta delle sonde SpectrumOrange, SpectrumGreen o SpectrumAqua etichettate direttamente o indirettamente dipende dalluso e dalla combinazione di altri fluorofori nel test FISH.
o Sonde per verniciatura dellintero cromosoma (WPP) |
| C. | Ibridazione in situ: siamo in grado di ottimizzare le condizioni di ibridazione FISH e fornire una gamma completa di servizi FISH. |
| D. | Interpretazione dei risultati: il nostro sistema di analisi delle immagini FISH è costituito da un microscopio a fluorescenza, una fotocamera con dispositivo ad accoppiamento di carica (“CCD”) e un software di analisi delle immagini Tutti e tre i componenti sono forniti dai nostri fornitori di componenti con modifiche interne. Attraverso luso di sonde FISH, il sistema di analisi delle immagini consente ai medici di rilevare e localizzare la presenza o lassenza di specifiche sequenze di DNA nei cromosomi. |
| E. | Pr Diagnosi enatale: i nostri kit ottimizzati per la diagnosi prenatale offrono tecnologie innovative e metodi standard applicati alla diagnosi dei disturbi fetali.
o Trisomia (21/18/13/12/9/8) |
| F. | Diagnosi e prognosi del cancro: molti kit di test per la diagnosi del cancro sono disponibili nella nostra azienda. Puoi anche personalizzare altre sonde per la diagnosi del cancro in base alle tue esigenze.
o Cancro alla vescica |
| G. | Reagenti per FISH: i nostri reagenti e soluzioni ottimizzati ti aiuteranno a eseguire i tuoi esperimenti FISH in modo più fluido ed efficiente. |
| H. | Caratteristiche: i vantaggi dei nostri servizi e prodotti sono i seguenti:
o Semplice, facile, veloce e ripetibile |
Citazioni / Riferimenti
Esempi di sonde FISH:
Sonda di pittura del cromosoma umano 1 (verde) |
Sonda di pittura del braccio del cromosoma umano 1 |
Sonda di pittura a fascia terminale del cromosoma umano 1 |
Sonda centromero cromosoma 3 umano |
Cromosoma umano e 1 sonde subtelomere |
Segnale di ibridazione della sonda del gene XIST umano ( rosso) |
| TABELLA 1: Servizi di FISH personalizzati | ||
| SERVIZIO | DESCRIZIONE | Prezzo |
| Cromosoma / Preparazione cellulare | Possiamo aiutarti a eseguire il cellulare cromosoma FISH (FISH su interfase, metafase e cellule in coltura) e tessuto cromosoma FISH (FISH su vetrini cellulari o su tessuto fissato in formalina, inclusi in paraffina). | ORDINAZIONE |
| Progettazione, etichettatura, purificazione e test di sonde | Il nostro consolidato la procedura operativa standard consente s efficiente ottimizzazione della varietà di etichettatura di sonde fluorescenti. Sono disponibili anche sonde personalizzate. La scelta delle sonde SpectrumOrange, SpectrumGreen o SpectrumAqua con etichetta diretta dipende dalluso e dalla combinazione di altri fluorofori nel dosaggio FISH. | ORDINAZIONE |
| Ibridazione in situ | Abbiamo ottimizzato le condizioni di ibridazione FISH e possiamo fornire tutti i tipi di FISH servizio per i ricercatori. | ORDINAZIONE |
| Interpretazione dei risultati | Il nostro sistema di analisi delle immagini FISH è costituito da un microscopio a fluorescenza, una fotocamera con dispositivo ad accoppiamento di carica (“CCD”) e un software di analisi delle immagini. Tutti e tre i componenti sono forniti dai nostri fornitori di componenti con modifiche interne. Attraverso luso di sonde FISH, il sistema di analisi per immagini consente ai medici di rilevare e localizzare la presenza o lassenza di sequenze di DNA specifiche nei cromosomi. | ORDINAZIONE |
Tutti i servizi personalizzati elencati & i prodotti sono solo a scopo di ricerca, non destinati alluso farmaceutico, diagnostico, terapeutico o per qualsiasi uso umano in vivo.