Cosè la trasformazione del DNA
La trasformazione plasmidica o vettoriale è il processo mediante il quale il DNA esogeno viene trasferito nella cellula ospite. La trasformazione di solito implica lassorbimento del DNA in cellule batteriche, di lievito o vegetali, mentre la trasfezione è un termine solitamente riservato alle cellule di mammifero. Tipicamente il metodo per la trasformazione di un costrutto di DNA in una cellula ospite è la trasformazione chimica, lelettroporazione o il bombardamento di particelle. Nella trasformazione chimica, le cellule vengono rese competenti (in grado di assorbire il DNA esogeno) mediante trattamento con cationi bivalenti come il cloruro di calcio, che rendono il batterico parete cellulare più permeabile al DNA. Lo shock termico viene utilizzato per formarsi temporaneamente pori nella membrana cellulare, consentendo il trasferimento del DNA esogeno nella cellula. Nellelettroporazione, un breve impulso elettrico viene utilizzato per rendere temporaneamente permeabile la cellula batterica. Il bombardamento di particelle, viene tipicamente utilizzato per la trasformazione delle cellule vegetali. Le particelle di oro o tungsteno sono rivestite con il costrutto di DNA e fisicamente forzate nella cellula dalla pistola genetica.
Protocollo di trasfezione del DNA “
Guida alla risoluzione dei problemi di trasfezione del DNA “