Online protokollok

Foszfáttal pufferolt sóoldat (rövidítve: A PBS) egy pufferoldat, amelyet általában a biológiai kutatásban használnak. Ez egy sós oldat, amely nátrium-kloridot, nátrium-foszfátot és (egyes kiszerelésekben) kálium-kloridot és kálium-foszfátot tartalmaz. A puffer segít fenntartani az állandó pH-értéket. Az oldat ozmolaritása és ionkoncentrációja általában megegyezik az emberi testével (izotóniás).

Alkalmazások

A Teomics Cryoglass ™ technológiájával mindössze három óra alatt krioszekcionálja a szövetét.

A PBS-nek sok felhasználása van, mert izotóniás és nem toxikus a sejtekre. Anyagok hígítására használható. Sejteket tartalmazó edények öblítésére szolgál. A PBS alkalmazható hígítószerként a biomolekulák szárítására szolgáló eljárásokban, mivel a benne lévő vízmolekulák az anyag (például fehérje) körül strukturálódnak, hogy „szárítsák” és szilárd felületre rögzítsék. Az anyaghoz kötődő vékony vízréteg megakadályozza a denaturációt vagy más konformációs változásokat. A karbonátpufferek ugyanarra a célra használhatók, de kevésbé hatékonyak. A PBS felhasználható referencia-spektrum felvételére a fehérje-adszorpció ellipszometriás mérésekor.

Adalékok használhatók a funkció hozzáadására. Például az EDTA-val ellátott PBS-t a csatolt és összecsomósodott sejtek leválasztására is használják. Kétértékű fémeket, például cinket azonban nem lehet hozzáadni, mivel ez csapadékot eredményez. Az ilyen típusú alkalmazásokhoz a Good pufferei ajánlottak.

Előkészítés

A PBS előkészítésének sokféle módja van. Néhány készítmény nem tartalmaz káliumot, míg mások kalciumot vagy magnéziumot. Az egyik leggyakoribb készítményt az alábbiakban ismertetjük.

10 liter 10x PBS törzs készíthető fel feloldva

• 800 g NaCl-ot,
• 20 g KCl,
• 144 g Na2HPO4 · 2H2O
• 24 g KH2PO4
• 8 L desztillált víz.

Teljes keverés után töltse fel a végső oldatot 10 literre. A 10-szeres törzsoldat pH-ja hozzávetőlegesen 6,8 lesz, de 1x PBS-re hígítva 7,4-re kell váltania. Pufferoldatok készítésekor jó gyakorlat mindig megmérni a pH-t. közvetlenül pH-mérővel. Szükség esetén a pH-értéket sósavval vagy nátrium-hidroxiddal állíthatjuk be. Hígításkor a kapott 1x PBS végkoncentrációja 137 mM NaCl, 10 mM foszfát, 2,7 mM KCl és pH-ja legyen. 7.4.
Egy másik készítményt a Molecular Cloning by Sambrook, Fritsch és Maniatis B.12. Függeléke ismertet a következőképpen:

1 liter 1X PBS-hez a következőképpen kell elkészíteni:

1. Kezdje 800 ml desztillált vízzel:
2. adjon hozzá 8 g NaCl-ot.
3. adjon 0,2 g KCl-ot.
4. adjon 1,44 g Na2HPO4-et. .
5. Adjunk hozzá 0,24 g KH2PO4-et.
6. Állítsuk a pH-t 7,4-re sósavval.
7. Adjunk hozzá desztillált vizet 1 liter teljes térfogatra.

Az oldatot adagoljuk alikvot részekbe és sterilizáljuk autoklávozással (20 perc, 121 ° C, folyadékciklus). Szobahőmérsékleten tárolandó.

1. Dulbecco, R. és mtsai. (1954): A tiszta vonalak plakkképződése és izolálása poliomyelitis vírusokkal. In: J. Exp. Med. köt. 99 (2), 167-182. PMID 13130792
2. Sambrook, Fritsch és Maniatis (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2. kiadás, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, 3. kötet, B.12. Melléklet
3. A cikk egyes részei a “Foszfáttal pufferolt sóoldatból származnak. A Wikipédiában a szabad enciklopédia. Letöltve: 2008. szeptember 17-én, a következőtől: http://en.wikipedia.org/wiki/Phosphate_buffered_saline.” Ezt a cikket tudományos pontosság szempontjából felülvizsgálták, és a Wikipedia GNU Free Documentation License (GFDL) szabványának megfelelően használják.