Fluoreszcens szituációs hibridizáció (FISH)
Fluoreszcens szituációs hibridizáció (FISH)
Mi az a HAL?
Hogyan működik a FISH?
Mire használható a FISH?
Hányféle próba a FISH számára?
Szolgáltatásaink és termékeink?
Idézetek / hivatkozások?
********************************************* *************************************************** ***************************************************
Mi a FISH?
A fluoreszcencia in situ hibridizáció (FISH) egyfajta citogenetikai technika, amely fluoreszcens próbákat alkalmaz a techromoszóma egy részét megkötve a szekvencia nagyfokú komplementaritásának kimutatására. Fluorescencemicroscopy segítségével megtudhatjuk, hol kötődött a fluoreszcens szonda a thechromosomához. Ez a technika újszerű módot kínál a kutatók számára a genetikai anyag vizualizálására és feltérképezésére az egyes sejtekben, beleértve a specifikus géneket vagy génrészeket. Fontos eszköz a különféle kromoszóma-rendellenességek és más genetikai mutációk megértéséhez. A kromoszómák vizsgálatához használt legtöbb technikától eltérően a FISH-t nem kell aktívan osztódó sejteken elvégezni, ami nagyon sokoldalú eljárássá teszi.
1. ábra A FISH kísérlet elvének vázlata egy gén lokalizálásához a sejtmagban.
Hogyan működik a FISH?
A FISH hasznos például abban, hogy segítsen egy kutatónak felismerni, hogy egy adott gén hol esik az egyén kromoszómáiba. Így működik:
o Készítsen egy próbát, amely kiegészíti az ismert szekvenciát . A szonda készítésekor jelölje meg fluoreszcens markerrel, pl. fluoreszcein, olyan nukleotidok beépítésével, amelyekhez kapcsolódik a marker.
o Helyezze a kromoszómákat egy mikroszkóp tárgylemezére és denaturálja őket.
o Denaturálja a szondát, és adja hozzá a mikroszkóp tárgylemezéhez, így a próba hibridizálhat a komplementerével. hely.
o Mossa le a felesleges szondát, és fluoreszcens mikroszkóp alatt figyelje meg a kromoszómákat. A szonda egy vagy több fluoreszcens jelként fog megjelenni a mikroszkópban, attól függően, hogy hány hibridizációs hellyel tud hibridizálni.
2. ábra Az öt alapvető lépés a FISH. (Oliveira és French 2005)
Milyen betegségek esetén alkalmazható a FISH?
A FISH-t számos diagnosztikai alkalmazásban széles körben használják: numerikus és strukturális rendellenességek azonosítására, a marker kromoszómák jellemzésére, a terápia hatásainak nyomon követésére, a minimális maradvány betegség kimutatására, a sejtek eredetének követésére a csontvelő-átültetés után, deléció vagy amplifikáció régióinak azonosítása, kromoszóma-rendellenességek kimutatása nem osztódó vagy terminálisan differenciálódott sejtekben, a klonális sejtek származási szerepének meghatározása stb. Sőt, számos alkalmazása van a kutatásban: nem véletlenszerű kromoszóma-átrendeződések azonosítása, a transzlokáció molekuláris töréspontjának azonosítása, a gyakran törölt régiók azonosítása, a gének feltérképezése, a szomatikus sejtek hibridjeinek jellemzése, az amplifikált gének azonosítása, az átrendeződés mechanizmusának tanulmányozása. A FISH-t két biológiai faj genomjának összehasonlítására is használják az evolúciós összefüggések levezetésére.
Hányféle próba a FISH számára?
A kutatók általában három különböző típusú FISH-szondát használnak, amelyek mindegyikének más és más alkalmazása van:
A lokusz-specifikus próbák a kromoszóma egy adott régiójához kötődnek. Ez a típusú szonda akkor hasznos, ha a kutatók egy gén kis részét izolálták, és meg akarják állapítani, hogy a gén melyik kromoszómán található.
Az egyes kromoszómák közepén található ismétlődő szekvenciákból alphoid vagy centromer ismétlődő szondákat hoznak létre. A kutatók ezeket a szondákat használják annak megállapítására, hogy az egyén rendelkezik-e a megfelelő számú kromoszómával. Ezeket a szondákat “lokuszspecifikus próbákkal” kombinálva is fel lehet használni annak megállapítására, hogy az egyénnek hiányzik-e egy adott kromoszómából származó genetikai anyag.
A teljes kromoszómaszondák valójában kisebb próbák gyűjteményei, amelyek mindegyike különböző szekvenciához kötődik egy adott kromoszóma hossza. Különböző fluoreszcens festékek keverékével jelölt több szonda segítségével a tudósok képesek minden egyes kromoszómát a saját egyedi színükön jelölni. Az így kapott kromoszóma színes térképe spektrális kariotípus néven ismert. Az egész kromoszóma-próbák különösen hasznosak kromoszóma-rendellenességek vizsgálatakor, például amikor az egyik kromoszóma egy része egy másik kromoszóma végéhez kapcsolódik.
Szolgáltatásaink és termékeink:
Creative Biolabs az egyedi fluoreszcencia in situ hibridizációs (FISH) szolgáltatás teljes skáláját kínálja a szonda tervezésétől, a kromoszóma / sejt előkészítéstől a szakértői eredmények értelmezéséig.
| A. | Kromoszóma / sejt előkészítés: Segíthetünk a FISH (FISH interfázisú, metafázisos és tenyésztett sejteken), a szöveti kromoszóma FISH (FISH formalin-fixált, paraffin- beágyazott szövet vagy sejtlemezek) és az RNS-FISH (FISH az intracelluláris RNS lokalizációjának, RNS feldolgozásának, kvantitációjának tanulmányozására). Számos tesztet hajtottunk végre a citogenetikai tárgylemezek előállításának hatékonyságának javítása és a FISH-jelek növelése céljából. Az általános protokoll több módosítása jobb kromoszóma elterjedést, jobb kromoszóma morfológiát és rövidebb hibridizációs időket eredményezett, miközben világosabb FISH jeleket eredményezett. |
| B . | Szondák tervezése, címkézése, tisztítása és tesztje: A FISH szondáink szintetikus DNS-darabok, amelyek fluoreszcens indikátorral párosulnak, így a kromoszómák vagy gének, amelyekhez kötődnek, közvetlenül láthatóvá válhatnak képalkotó elemzésünk során. rendszer. Megalapozott szabványos működési eljárásunk lehetővé teszi a különböző fluoreszcens szondák címkézésének hatékony optimalizálását. Kísérleti szolgáltatásokat is tudunk nyújtani az Ön speciális igényeinek kielégítésére. Testreszabott szondák is rendelkezésre állnak. A közvetlenül vagy közvetetten jelölt SpectrumOrange, SpectrumGreen vagy SpectrumAqua szondák megválasztása más fluorofórok FISH-vizsgálatban való alkalmazásától és kombinációjától függ.
o Egész kromoszómafestő szondák (WPP) |
| C. | Helyi hibridizáció: Optimalizálhatjuk a FISH hibridizációs körülményeket, és teljes körű FISH szolgáltatást nyújthatunk. |
| D. | Eredményértelmezés: A FISH képalkotó elemző rendszerünk egy fluoreszcens mikroszkópból, egy töltéscsatolt eszköz (“CCD”) kamerából és képalkotó elemző szoftverből áll. Mindhárom alkatrészt alkatrész-beszállítóink belső módosításokkal biztosítják. A FISH szondák alkalmazásával a képalkotó elemzési rendszer lehetővé teszi az orvosok számára, hogy kimutassák és lokalizálják a kromoszómákban található specifikus DNS-szekvenciák jelenlétét vagy hiányát. |
| E. | Pr enatalis diagnózis: Optimalizált prenatális diagnosztikai detektáló készleteink innovatív technológiákat és standard módszereket kínálnak a magzati rendellenességek diagnosztizálására.
o Trisomy (21/18/13/12/9/8) |
| F. | Rákdiagnosztika és prognózis: Számos rákdiagnosztikai tesztkészlet áll rendelkezésre cégünkben. Igénye szerint testreszabhat más rákdiagnosztikai szondákat is.
o Hólyagrák |
| G. | Reagensek a FISH számára: Optimalizált reagenseink és megoldásaink segítenek a FISH-kísérletek zökkenőmentesebb és hatékonyabb végrehajtásában. |
| H. | Jellemzők: Szolgáltatásaink és termékeink előnyei a következők:
o Egyszerű, könnyű, gyors és megismételhető |
Idézetek / hivatkozások
FISH szonda minták:
1. emberi kromoszóma festő szonda (zöld) |
1. emberi kromoszóma karfestő szonda |
Az 1. emberi kromoszóma terminálsávos festőszondája |
Humán 3. kromoszóma centromer szonda |
Emberi kromoszóma e 1 szubtelomer szonda |
Humán XIST génszonda hibridizációs jele ( piros) |
| 1. TÁBLÁZAT: Egyedi HAL-szolgáltatások | ||
| SZOLGÁLTATÁS | LEÍRÁS | Ár |
| Kromoszóma / sejt előkészítés | Segíthetünk a sejtek elvégzésében kromoszóma FISH (FISH interfázisú, metafázisos és tenyésztett sejteken) és szöveti kromoszóma FISH (FISH formalinban rögzített, paraffinba ágyazott szöveteken vagy sejtlemezeken). | RENDELÉS |
| Szondák tervezése, címkézése, tisztítása és tesztelése | Jól megalapozott szabványos működési eljárás lehetővé teszi s a fluoreszcens szondák különféle címkézésének hatékony optimalizálása. Testreszabott szondák is rendelkezésre állnak. A közvetlenül címkézett SpectrumOrange, SpectrumGreen vagy SpectrumAqua szondák kiválasztása más fluorofórok használatától és kombinációjától függ a FISH vizsgálatban. | RENDELÉS |
| Helyi hibridizáció | Optimalizáltuk a FISH hibridizációs feltételeket, és mindenféle FISH-t biztosítani tudunk szolgáltatás kutatók számára. | MEGRENDELÉS |
| Eredményértelmezés | A FISH képalkotó elemző rendszerünk fluoreszcens mikroszkópból, töltéscsatlakozós (CCD) kamerából és képalkotó elemző szoftverből áll. Mindhárom alkatrészt szállítóink szállítják belső módosítások. A FISH szondák segítségével a képalkotó elemző rendszer lehetővé teszi az orvosok számára, hogy kimutassák és lokalizálják a kromoszómákban található specifikus DNS-szekvenciák jelenlétét vagy hiányát. | RENDELÉS |
Az összes felsorolt testreszabott szolgáltatás & termékek csak kutatási célokra szolgálnak, nem gyógyszerészeti, diagnosztikai, terápiás vagy bármilyen in vivo emberi felhasználásra szántak.