Fluoreszierende In-Situ-Hybridisierung (FISH)

Was ist FISH?

Wie funktioniert FISH?

Wofür wird FISH verwendet?

Wie viele Arten von Sonden für FISH?

Unsere Dienstleistungen und Produkte?

Zitate / Referenzen?

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Was ist FISH?

Die Fluoreszenz-in-situ-Hybridisierung (FISH) ist eine Art zytogenetische Technik, bei der fluoreszierende Sonden, die Teile des Chromosoms binden, verwendet werden, um einen hohen Grad an Sequenzkomplementarität zu zeigen. Fluoreszenzkämroskopie kann verwendet werden, um herauszufinden, wo die fluoreszierende Sonde an das Chromosom gebunden ist. Diese Technik bietet Forschern eine neuartige Möglichkeit, das genetische Material in einer einzelnen Zelle zu visualisieren und abzubilden, einschließlich spezifischer Gene oder Teile von Genen. Es ist ein wichtiges Instrument zum Verständnis einer Vielzahl von chromosomalen Anomalien und anderen genetischen Mutationen. Im Gegensatz zu den meisten anderen Techniken, die für die Chromosomenuntersuchung verwendet werden, muss FISH nicht an Zellen durchgeführt werden, die sich aktiv teilen, was es zu einem sehr vielseitigen Verfahren macht.

Abb. 1 Schema des Prinzips des FISH-Experiments zur Lokalisierung eines Gens im Kern.

Wie funktioniert FISH?

FISH ist beispielsweise nützlich, um einem Forscher zu helfen, zu identifizieren, wo ein bestimmtes Gen in die Chromosomen eines Individuums fällt. So funktioniert es:
o Machen Sie eine Sonde komplementär zur bekannten Sequenz . Markieren Sie die Sonde bei der Herstellung mit einem fluoreszierenden Marker, z. Fluorescein durch Einbau von Nukleotiden, an die der Marker gebunden ist.
o Legen Sie die Chromosomen auf einen Objektträger und denaturieren Sie sie.
Denaturieren Sie die Sonde und fügen Sie sie dem Objektträger hinzu, damit die Sonde mit ihrem Komplementär hybridisieren kann o.
o Die überschüssige Sonde abwaschen und die Chromosomen unter einem Fluoreszenzmikroskop beobachten. Die Sonde wird im Mikroskop als ein oder mehrere Fluoreszenzsignale angezeigt, je nachdem, an wie viele Stellen sie hybridisieren kann.

Abb. 2 Die fünf grundlegenden Schritte von FISH. (Oliveira und Französisch 2005)

Wofür wird FISH verwendet?

FISH wird häufig für verschiedene diagnostische Anwendungen verwendet: Identifizierung numerischer und struktureller Anomalien, Charakterisierung von Markerchromosomen, Überwachung der Therapieeffekte, Erkennung minimaler Resterkrankungen, Verfolgung des Ursprungs von Zellen nach Knochenmarktransplantation, Identifizierung von Deletions- oder Amplifikationsregionen, Nachweis von Chromosomenanomalien in nicht teilenden oder terminal differenzierten Zellen, Bestimmung der Abstammungsbeteiligung klonaler Zellen usw. Darüber hinaus hat es viele Anwendungen in der Forschung: Identifizierung nicht zufälliger Chromosomenumlagerungen, Identifizierung des molekularen Translokationsbruchpunkts, Identifizierung häufig deletierter Regionen, Genkartierung, Charakterisierung somatischer Zellhybride, Identifizierung amplifizierter Gene, Untersuchung des Mechanismus von Umlagerungen. FISH wird auch verwendet, um die Genome zweier biologischer Spezies zu vergleichen, um evolutionäre Beziehungen abzuleiten.

Wie viele Arten von Sonden für FISH?

Im Allgemeinen verwenden Forscher drei verschiedene Arten von FISH-Sonden, von denen jede eine andere Anwendung hat:
Ortsspezifische Sonden binden an eine bestimmte Region eines Chromosoms. Diese Art von Sonde ist nützlich, wenn Forscher einen kleinen Teil eines Gens isoliert haben und bestimmen möchten, auf welchem Chromosom sich das Gen befindet.
Alphoide oder zentromere Wiederholungssonden werden aus sich wiederholenden Sequenzen in der Mitte jedes Chromosoms erzeugt. Forscher verwenden diese Sonden, um festzustellen, ob ein Individuum die richtige Anzahl von Chromosomen hat. Diese Sonden können auch in Kombination mit „ortsspezifischen Sonden“ verwendet werden, um festzustellen, ob einem Individuum genetisches Material von einem bestimmten Chromosom fehlt.
Sonden für ganze Chromosomen sind tatsächlich Sammlungen kleinerer Sonden, von denen jede an eine andere Sequenz entlang bindet die Länge eines bestimmten Chromosoms. Mithilfe mehrerer Sonden, die mit einer Mischung verschiedener Fluoreszenzfarbstoffe markiert sind, können Wissenschaftler jedes Chromosom in seiner eigenen Farbe markieren. Die resultierende Farbkarte des Chromosoms ist als spektraler Karyotyp bekannt. Ganze Chromosomensonden sind besonders nützlich, um Chromosomenanomalien zu untersuchen, beispielsweise wenn ein Stück eines Chromosoms am Ende eines anderen Chromosoms befestigt ist.

Unsere Dienstleistungen und Produkte:

Creative Biolabs bietet eine umfassende Palette an kundenspezifischen Fluoreszenz-in-situ-Hybridisierungsdiensten (FISH), vom Sondendesign über die Chromosomen- / Zellpräparation bis hin zur Interpretation von Expertenergebnissen.

Zitate / Referenzen

Beispiele für FISH-Sonden:

Alle aufgelisteten benutzerdefinierten Dienste & Produkte sind nur für Forschungszwecke bestimmt und nicht für pharmazeutische, diagnostische, therapeutische oder In-vivo-Anwendungen beim Menschen bestimmt.