Protokoly online (Čeština)

Fyziologický roztok pufrovaný fosfáty (zkráceně jako PBS) je pufrovací roztok běžně používaný v biologickém výzkumu. Jedná se o slaný roztok obsahující chlorid sodný, fosforečnan sodný a (v některých formulacích) chlorid draselný a fosforečnan draselný. Pufr pomáhá udržovat konstantní pH. Osmolarita a koncentrace iontů v roztoku se obvykle shodují s koncentracemi v lidském těle (izotonické).

Aplikace

Kryosekci tkáně za pouhé tři hodiny pomocí Cryoglass ™ od společnosti Teomics.

PBS má mnoho využití, protože je izotonický a netoxický pro buňky. Může být použit k ředění látek. Používá se k oplachování nádob obsahujících buňky. PBS lze použít jako ředidlo v metodách sušení biomolekul, protože molekuly vody v něm budou strukturovány kolem látky (například proteinu), která má být „vysušena“ a imobilizována na pevný povrch. Tenký vodní film, který se váže na látku, zabraňuje denaturaci nebo jiným konformačním změnám. Uhličitanové pufry lze použít pro stejný účel, ale s menší účinností. PBS lze použít k získání referenčního spektra při měření adsorpce bílkovin v elipsometrii.

K přidání funkce lze použít přísady. Například PBS s EDTA se také používá k odpojení připojených a shlukovaných buněk. Dvojmocné kovy, jako je zinek, však nelze přidat, protože to bude mít za následek srážení. U těchto typů aplikací se doporučují vyrovnávací paměti společnosti Good.

Příprava

Existuje mnoho různých způsobů přípravy PBS. Některé formulace neobsahují draslík, zatímco jiné obsahují vápník nebo hořčík. Jeden z nejběžnějších přípravků je popsán níže.

10litrová zásoba 10x PBS lze připravit rozpuštěním

• 800 g NaCl,
• 20 g KCl,
• 144 g Na2HPO4 · 2H2O
• 24 g KH2PO4
• 8 L destilované vody.

Po úplném promíchání doplňte konečný roztok na 10 L. pH 10X zásobního roztoku bude přibližně 6,8, ale po zředění na 1x PBS by se mělo změnit na 7,4. Při výrobě pufrových roztoků je dobré vždy měřit pH přímo pomocí pH metru. V případě potřeby lze pH upravit pomocí kyseliny chlorovodíkové nebo hydroxidu sodného.

Po zředění by výsledný 1x PBS měl mít konečnou koncentraci 137 mM NaCI, 10 mM fosfátu, 2,7 mM KCI a pH 7.4.
Další příprava je popsána v Molecular Cloning autorů Sambrook, Fritsch a Maniatis, dodatek B.12 takto:

Pro 1 litr 1X PBS připravte následovně:

1. Začněte s 800 ml destilované vody:
2. Přidejte 8 g NaCl.
3. Přidejte 0,2 g KCl.
4. Přidejte 1,44 g Na2HPO4 .
5. Přidejte 0,24 g KH2PO4.
6. Upravte pH pomocí HCl na 7,4.
7. Přidejte destilovanou vodu na celkový objem 1 litr.

Roztok dávkujte do alikvotů a sterilizujte autoklávováním (20 min, 121 ° C, kapalný cyklus). Skladujte při pokojové teplotě.

1. Dulbecco, R. a kol. (1954): Tvorba plaků a izolace čistých linií s viry poliomyelitidy. In: J. Exp. Med. sv. 99 (2), s. 167-182. PMID 13130792
2. Sambrook, Fritsch a Maniatis (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manuál, 2. vydání, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, svazek 3, dodatek B.12
3. Části tohoto článku pocházejí z „Fosfátem pufrovaného solného roztoku. Ve Wikipedii je to bezplatná encyklopedie. Citováno 17. září 2008, z http://en.wikipedia.org/wiki/Phosphate_buffered_saline.“ Tento článek byl zkontrolován z hlediska vědecké přesnosti a je používán v souladu s licencí GNU Free Documentation License (GFDL) na Wikipedii.