Fluorescenční hybridizace in situ (FISH)
Fluorescenční hybridizace in situ (FISH)
Co je RYBA?
Jak FISH funguje?
Na co se FISH používá?
Kolik typů sond pro FISH?
Naše služby a produkty?
Citace / odkazy?
********************************************* **************************************************** *************************************************** / p>
Co je to RYBA?
Fluorescenční in situ hybridizace (FISH) je druh cytogenetické techniky, která využívá fluorescenční sondy vázající části chromozomu k prokázání vysokého stupně sekvenční komplementarity. Pomocí fluorescenční mikroskopie lze zjistit, kde se fluorescenční sonda váže na chromozom. Tato technika poskytuje vědcům nový způsob vizualizace a mapování genetického materiálu v jednotlivé buňce, včetně specifických genů nebo částí genů. Je to důležitý nástroj pro pochopení různých chromozomálních abnormalit a dalších genetických mutací. Na rozdíl od většiny ostatních technik používaných ke studiu chromozomů nemusí být FISH prováděno na buňkách, které se aktivně dělí, což z něj dělá velmi univerzální postup.
Obr. 1 Schéma principu experimentu FISH k lokalizaci genu v jádru.
Jak FISH funguje?
FISH je užitečný například k tomu, aby pomohl badateli určit, kde konkrétní gen spadá do chromozomů jednotlivce. Funguje to takto:
o Udělejte sondu doplňující známou sekvenci . Při výrobě sondy ji označte fluorescenčním markerem, např. fluorescein, začleněním nukleotidů, které mají k sobě připojený marker.
o Umístěte chromozomy na podložní sklíčko mikroskopu a denaturujte je.
o Denatujte sondu a přidejte ji na podložní sklíčko mikroskopu, což umožní hybridizaci sondy na její místo.
o Omyjte přebytečnou sondu a sledujte chromozomy pod fluorescenčním mikroskopem. Sonda se v mikroskopu zobrazí jako jeden nebo více fluorescenčních signálů, v závislosti na tom, na kolik míst může hybridizovat.
Obr. 2 Pět základních kroků RYBY. (Oliveira and French 2005)
Na co se FISH používá?
FISH je široce používán pro několik diagnostických aplikací: identifikace numerických a strukturálních abnormalit, charakterizace markerových chromozomů, monitorování účinků terapie, detekce minimálního reziduálního onemocnění, sledování původu buněk po transplantaci kostní dřeně, identifikace oblastí delece nebo amplifikace, detekce abnormalit chromozomů v nedělících se nebo terminálně diferencovaných buňkách, stanovení liniového zapojení klonálních buněk atd. Kromě toho má mnoho aplikací ve výzkumu: identifikace nenáhodných přeskupení chromozomů, identifikace translokačních molekulárních zlomů, identifikace běžně deletovaných oblastí, genové mapování, charakterizace hybridů somatických buněk, identifikace amplifikovaných genů, studium mechanismu přesmyků. FISH se také používá k porovnání genomů dvou biologických druhů za účelem odvození evolučních vztahů.
Kolik typů sond pro FISH?
Vědci obecně používají tři různé typy sond FISH, z nichž každá má jinou aplikaci:
Locus specifické sondy se vážou na konkrétní oblast chromozomu. Tento typ sondy je užitečný, když vědci izolovali malou část genu a chtějí zjistit, na kterém chromozomu se gen nachází.
Alpidní nebo centromerní opakovací sondy jsou generovány z opakujících se sekvencí nalezených ve středu každého chromozomu. Vědci pomocí těchto sond určují, zda má jedinec správný počet chromozomů. Tyto sondy lze také použít v kombinaci s „lokusově specifickými sondami“ k určení, zda jednotlivci chybí genetický materiál z konkrétního chromozomu.
Celé chromozomové sondy jsou ve skutečnosti soubory menších sond, z nichž každá se váže na jinou sekvenci podél délka daného chromozomu. Pomocí více sond značených směsí různých fluorescenčních barviv jsou vědci schopni označit každý chromozom v jeho vlastní jedinečné barvě. Výsledná plnobarevná mapa chromozomu je známá jako spektrální karyotyp. Celé chromozomové sondy jsou zvláště užitečné pro zkoumání chromozomálních abnormalit, například když je část jednoho chromozomu připojena ke konci jiného chromozomu.
Naše služby a produkty:
Creative Biolabs nabízí celou řadu služeb vlastní hybridní fluorescenční in situ hybridizace (FISH) od návrhu sondy, přípravy chromozomů / buněk až po interpretaci výsledků expertů.
| A. | Příprava chromozomů / buněk: Můžeme vám pomoci s provedením buněčných chromozomů FISH (FISH na interfázových, metafázových a kultivovaných buňkách), tkáňových chromozomů FISH (FISH na formalinu fixovaných, parafínových vložené tkáňové nebo buněčné sklíčka) a RNA-FISH (FISH ke studiu intracelulární lokalizace RNA, zpracování RNA, kvantifikace). Provedli jsme řadu testů zaměřených na zlepšení účinnosti přípravy cytogenetického sklíčka a na zvýšení signálů FISH. Několik modifikací obecného protokolu vedlo k lepšímu šíření chromozomů, lepší morfologii chromozomů a kratším hybridizačním časům, přičemž poskytlo jasnější signály FISH. |
| B . | Návrh, značení, čištění a testování sond: Naše sondy FISH jsou syntetické kousky DNA, které se spojí s fluorescenčním indikátorem, takže chromozomy nebo geny, na které se vážou, lze přímo vizualizovat pomocí naší zobrazovací analýzy Systém. Náš zavedený standardní operační postup umožňuje efektivní optimalizaci značení různých fluorescenčních sond. Můžeme také poskytnout experimentální služby, abychom vyhověli vašim zvláštním potřebám. K dispozici jsou také přizpůsobené sondy. Volba přímo nebo nepřímo značených sond SpectrumOrange, SpectrumGreen nebo SpectrumAqua závisí na použití a kombinaci jiných fluoroforů v testu FISH.
o Sondy pro barvení celého chromozomu (WPP) |
| C. | In situ hybridizace: Můžeme optimalizovat podmínky hybridizace FISH a poskytnout celou řadu služeb FISH. |
| D. | Interpretace výsledků: Náš zobrazovací analytický systém FISH se skládá z fluorescenčního mikroskopu, kamery s nabíjecím zařízením („CCD“) a softwaru pro zobrazovací analýzu.Všechny tři komponenty jsou dodávány našimi dodavateli komponent s interními úpravami. Díky použití sond FISH umožňuje systém zobrazovací analýzy lékařům detekovat a lokalizovat přítomnost nebo nepřítomnost specifických sekvencí DNA v chromozomech. |
| E. | Pr enatální diagnostika: Naše optimalizované sady pro detekci prenatální diagnostiky nabízejí inovativní technologie a standardní metody, které se používají k diagnostice poruch plodu.
o Trizomie (21/18/13/12/9/8) |
| F. | Diagnostika a prognóza rakoviny: V naší společnosti je k dispozici mnoho testovacích souprav pro diagnostiku rakoviny. Podle potřeby můžete také upravit další sondy pro diagnostiku rakoviny.
o Rakovina močového měchýře |
| G. | Reagencie pro FISH: Naše optimalizovaná činidla a řešení vám pomohou provádět vaše experimenty FISH plynuleji a efektivněji. |
| H. | Vlastnosti: Výhody našich služeb a produktů jsou následující:
o Jednoduché, snadné, rychlé a opakovatelné |
Citace / reference
FISH Ukázky sondy:
Lakovací sonda lidského chromozomu 1 (zelená) |
Lidská chromozomová 1 lakovací sonda na rameno |
Sonda pro terminální lakování lidského chromozomu 1 |
Centromérová sonda lidského chromozomu 3 |
Lidský chromozom e 1 subtelomérové sondy |
Hybridizační signál lidské genové sondy XIST ( červená) |
| TABULKA 1: Vlastní FISH Services | ||
| SLUŽBA | POPIS | Cena |
| Příprava chromozomu / buňky | Můžeme vám pomoci provést buňku chromosom FISH (FISH na mezifázových, metafázových a kultivovaných buňkách) a tkáňový chromozom FISH (FISH na formalínu fixované, parafínem zalité tkáňové nebo buněčné sklíčka). | OBJEDNÁVÁNÍ |
| Návrh, značení, čištění a testování sond | Naše zavedené standardní operační postup povolit efektivní optimalizace značení různých fluorescenčních sond. K dispozici jsou také přizpůsobené sondy. Volba přímo označených sond SpectrumOrange, SpectrumGreen nebo SpectrumAqua závisí na použití a kombinaci jiných fluoroforů v testu FISH. | OBJEDNÁVÁNÍ |
| In Situ Hybridization | Optimalizovali jsme podmínky hybridizace FISH a můžeme poskytnout všechny druhy FISH služba pro výzkumné pracovníky. | OBJEDNÁVKA |
| Interpretace výsledků | Náš zobrazovací analytický systém FISH se skládá z fluorescenčního mikroskopu, kamery s nábojovou vazbou („CCD“) a softwaru pro zobrazovací analýzu. Všechny tři komponenty dodávají naši dodavatelé komponent s vnitřní modifikace. Díky použití sond FISH umožňuje systém zobrazovací analýzy lékařům detekovat a lokalizovat přítomnost nebo nepřítomnost specifických sekvencí DNA v chromozomech. | OBJEDNÁVKA |
Všechny uvedené přizpůsobené služby & produkty jsou určeny pouze pro výzkumné účely, nejsou určeny pro farmaceutické, diagnostické, terapeutické nebo humánní použití in vivo.